目的構(gòu)建鼠傷寒沙門菌ydiU基因敲除株,并比較敲除株與野生株在不同生存壓力條件培養(yǎng)基中的生長曲線,為進(jìn)一步研究ydiU基因及其編碼蛋白YdiU的功能奠定基礎(chǔ)。方法以鼠傷寒沙門菌ATCC14028株作為母本PCR擴(kuò)增含有ydiU基因上下游同源臂和氯霉素抗性片段的線性打靶基因,通過同源重組操作得到y(tǒng)diU基因敲除株ATCC14028ΔydiU。分別測定敲除株與與野生株在營養(yǎng)限制、氧化應(yīng)激、缺鐵、高鹽,高糖、低PH和吲哚等壓力培養(yǎng)基中的生長曲線,并對兩株細(xì)菌的生長特性進(jìn)行比較。結(jié)果經(jīng)PCR內(nèi)、外側(cè)鑒定及測序鑒定表明ydiU基因敲除株構(gòu)建成功。敲除株和野生株在LB培養(yǎng)基中培養(yǎng)6h即對數(shù)生長期后期時平均A₆₀₀值分別為0.805和0.894,而在培養(yǎng)時間9h即平臺期前期時檢測平均值分別為1.022和1.220。兩個生長關(guān)鍵期的細(xì)菌生長速度均表現(xiàn)為敲除株略為緩慢,但兩株菌最終在平臺期后期達(dá)到相同A值。在限制營養(yǎng)培養(yǎng)基(M9)中,敲除株增殖速度落后于野生株細(xì)菌,敲除株培養(yǎng)時間6h、9h和22h的平均A₆₀₀值分別為0.511、0.590和0.693,相同培...

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【文章目錄】：
材料與方法
    1 材料
        1.1 菌株與質(zhì)粒
        1.2 儀器和試劑
    2 方法
        2.1 引物設(shè)計(jì)合成
        2.2 基因缺失株ATCC14028ΔdiU-Cm的構(gòu)建
        2.3 基因缺失株ATCC14028ΔydiU的構(gòu)建
        2.4 測序鑒定
        2.5 ydiU基因敲除菌株壓力條件生長曲線測定
            2.5.1 細(xì)菌生長壓力條件
            2.5.2 生長曲線測定
結(jié)果
    1基因缺失株ATCC14028ΔYdiU-Cm和ATCC14028ΔYdiU的鑒定
    2基因敲除株在壓力條件下的生長特征
討論



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