目的：通過(guò)組織塊法分離培養(yǎng)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(human umibilical cordmesenchymal stem cells, hUCMSCs)，并用不同濃度脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)刺激細(xì)胞，探討LPS對(duì)hUCMSCs細(xì)胞增殖、凋亡的影響及其調(diào)控機(jī)制。研究低濃度LPS預(yù)處理對(duì)hUCMSCs的適應(yīng)性保護(hù)作用，并探討其潛在機(jī)制，為增強(qiáng)hUCMSCs的內(nèi)毒素耐受性提供理論基礎(chǔ)。 方法：1利用組織塊法從足月兒臍帶中分離培養(yǎng)hUCMSCs。倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)；MTT法檢測(cè)第3、5、10代細(xì)胞增殖活性；免疫熒光染色法測(cè)定細(xì)胞表面標(biāo)記物。 2采用不同濃度LPS（0、0.01、0.1、1.0、10.0、20.0、30.0、40.0、50.0μg/ml）刺激hUCMSCs。MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖活性；AO/EB染色法及流式細(xì)胞術(shù)（flowcytometry, FCM）檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況；酶聯(lián)免疫吸附法（enzyme-linkedimmunosorbent assay, ELISA）檢測(cè)Caspase-8、Caspase-3活性及DNA片段。 3低濃度LPS（0.1...

【文章頁(yè)數(shù)】：108 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
英文縮略詞表
中文摘要
Abstract
前言
第一部分 脂多糖對(duì)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞增殖及凋亡生物特性的影響
    第一節(jié) 人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞分離、培養(yǎng)及生物學(xué)特性檢測(cè)
        材料與方法
            一 主要試劑
            二 實(shí)驗(yàn)室試劑配制
            三 主要儀器
            四 實(shí)驗(yàn)標(biāo)本
            五 分離、培養(yǎng)方法
            六 細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察
            七 MTT 比色法檢測(cè) hUCMSCs 的增殖情況
            八 免疫熒光染色檢測(cè)細(xì)胞表面標(biāo)志物
        結(jié)果
            一 細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察
            二 MTT 比色法檢測(cè) hUCMSCs 的增殖情況
            三 免疫熒光檢測(cè)細(xì)胞表面標(biāo)記物
        討論
        結(jié)論
        參考文獻(xiàn)
    第二節(jié) 脂多糖對(duì)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞增殖及凋亡的影響
        材料與方法
            一 主要試劑
            二 實(shí)驗(yàn)室試劑配制
            三 主要儀器
            四 細(xì)胞培養(yǎng)及因素處理
            五 指標(biāo)檢測(cè)及方法
            六 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
        結(jié)果
            一 MTT 比色法檢測(cè)不同濃度 LPS 刺激對(duì) hUCMSCs 增殖的影響
            二 AO/EB 染色定性觀察不同濃度 LPS 刺激對(duì) hUCMSCs 凋亡的影響
            三 流式細(xì)胞儀定量檢測(cè)不同濃度 LPS 刺激 hUCMSCs 的凋亡率
            四 z-IETD-FMK 對(duì) hUCMSCs 細(xì)胞 Caspase-8、Caspase-3 及凋亡的影響
        討論
        結(jié)論
        參考文獻(xiàn)
第二部分 脂多糖預(yù)處理增強(qiáng)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)內(nèi)毒素耐受性及其作用機(jī)制的研究
    第一節(jié) 脂多糖預(yù)處理對(duì)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞凋亡的影響
        材料與方法
            一 主要試劑
            二 實(shí)驗(yàn)室試劑配制
            三 主要儀器
            四 細(xì)胞培養(yǎng)
            五 指標(biāo)檢測(cè)及方法
            六 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
        結(jié)果
            一 流式細(xì)胞儀檢測(cè) LPS 預(yù)處理介導(dǎo)的 hUCMSCs 抗凋亡作用
            二 Hoechst 33258 觀察 LPS 預(yù)處理介導(dǎo)的 hUCMSCs 抗凋亡作用
            三 低濃度 LPS 預(yù)處理對(duì) hUCMSCs 細(xì)胞存活率的影響
        討論
        結(jié)論
        參考文獻(xiàn)
    第二節(jié) 脂多糖預(yù)處理增強(qiáng)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞內(nèi)毒素耐受性機(jī)制的研究
        材料與方法
            一 主要試劑
            二 實(shí)驗(yàn)室試劑配制
            三 主要儀器
            四 細(xì)胞培養(yǎng)及因素處理
            五 指標(biāo)檢測(cè)及方法
            六 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
        結(jié)果
            一 LPS 預(yù)處理對(duì) hUCMSCs 細(xì)胞 c-FLIPL表達(dá)的影響
            二 si-FLIPL對(duì)低濃度 LPS 預(yù)處理介導(dǎo) hUCMSCs 細(xì)胞 c-FLIPL表達(dá)的影響
            三 si-FLIPL對(duì)低濃度 LPS 預(yù)處理誘導(dǎo)的抗細(xì)胞凋亡的影響
            四 si-FLIPL對(duì)低濃度LPS預(yù)處理誘導(dǎo)Caspase-8和Caspase-3活性的影響
            五 NF-κB 介導(dǎo)低濃度 LPS 預(yù)處理上調(diào) c-FLIPL的表達(dá)
        討論
        結(jié)論
        參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
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