本文關(guān)鍵詞：小鼠胚胎腭突細胞的培養(yǎng)和初級纖毛的觀察，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:通過對小鼠胚胎腭突上皮細胞的分離和體外培養(yǎng),建立穩(wěn)定良好的小鼠胚胎腭突上皮細胞原代培養(yǎng)方法;分離、培養(yǎng)小鼠胚胎腭突間充質(zhì)細胞,觀察其初級纖毛的情況,為后續(xù)小鼠胚胎腭突發(fā)育期間關(guān)鍵信號因子通過初級纖毛傳遞的實驗研究奠定基礎(chǔ)。方法:體式顯微鏡下剪取GD13.5的小鼠胚胎腭板,經(jīng)0.4%Dispase II酶消化過夜后,機械分離上皮組織和間充質(zhì)組織。1將上皮組織用0.05%胰蛋白酶消化,選擇含5%FBS和5ng/ml EGF的Medium 171培養(yǎng)基進行培養(yǎng),觀察細胞形態(tài)及其生長情況,運用P-CK和Vim免疫細胞化學(xué)染色法對細胞類型進行鑒定;2將間充質(zhì)組織用0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA混合液消化,加入含有10%FBS的DMEM/F12(1:1)培養(yǎng)基中進行原代培養(yǎng)及傳代,觀察細胞形態(tài)及其生長情況,采用P-CK和Vim免疫細胞化學(xué)染色法對細胞類型進行鑒定,免疫熒光雙標技術(shù)檢測間充質(zhì)細胞αα-tubulin和γ-tubulin的表達,觀察其初級纖毛的情況。結(jié)果:應(yīng)用Dispase II酶和胰酶雙重消化法,結(jié)合機械分離可以獲取純度較高的小鼠胚胎腭突上皮細胞和間充質(zhì)細胞。鏡下觀察:1上皮細胞彼此緊密相連成片后呈典型的鋪路石樣,免疫細胞化學(xué)染色結(jié)果顯示上皮細胞P-CK表達陽性;2間充質(zhì)細胞呈梭形或多角形散在生長,免疫細胞化學(xué)染色結(jié)果顯示間充質(zhì)細胞Vim表達陽性,免疫熒光雙標技術(shù)檢測間充質(zhì)細胞中αα-tubulin呈紅色熒光、γ-tubulin呈綠色熒光,應(yīng)用熒光顯微鏡成功觀察到小鼠胚胎腭突間充質(zhì)細胞上的初級纖毛結(jié)構(gòu)。結(jié)論:1結(jié)合機械分離和酶消化法可用于小鼠胚胎腭突上皮細胞和間充質(zhì)細胞的分離及培養(yǎng),并可獲得純度較高的小鼠胚胎腭突上皮細胞和間充質(zhì)細胞。2小鼠胚胎腭突間充質(zhì)細胞中有初級纖毛結(jié)構(gòu)。
【關(guān)鍵詞】：小鼠胚胎腭突 上皮細胞 間充質(zhì)細胞 初級纖毛
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R321
【目錄】：

• 中英文縮略詞表4-5
• 中文摘要5-6
• 英文摘要6-8
• 前言8-11
• 第一部分 小鼠胚胎腭突上皮細胞的培養(yǎng)及其鑒定11-23
• 材料與方法11-17
• 實驗結(jié)果17-19
• 討論19-23
• 第二部分 小鼠胚胎腭突間充質(zhì)細胞的培養(yǎng)、鑒定及其初級纖毛的觀察23-31
• 材料與方法23-25
• 實驗結(jié)果25-27
• 討論27-31
• 全文總結(jié)31-32
• 參考文獻32-36
• 綜述：初級纖毛與牙顱頜面發(fā)育的相關(guān)性研究進展36-43
• 參考文獻41-43
• 致謝43-44
• 作者簡介44

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前9條

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  本文關(guān)鍵詞：小鼠胚胎腭突細胞的培養(yǎng)和初級纖毛的觀察，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：373616