本文關(guān)鍵詞：甲基氧化偶氮甲醇誘導(dǎo)皮質(zhì)發(fā)育障礙動(dòng)物模型的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景:大腦皮質(zhì)發(fā)育障礙(malformation of cortical development,MCD)是由諸多基因和環(huán)境因素影響神經(jīng)細(xì)胞增殖、遷移和分化而致腦發(fā)育異常的一類(lèi)疾病,然而患者的臨床表現(xiàn)卻存在差異:有些患者癥狀出現(xiàn)早,表現(xiàn)為嚴(yán)重的神經(jīng)功能缺損,而有些患者則表現(xiàn)為癲癇或需要通過(guò)篩選才能發(fā)現(xiàn)的無(wú)明顯癥狀的神經(jīng)功能缺損。分子生物學(xué),遺傳學(xué)以及影像學(xué)的快速發(fā)展既豐富了人們對(duì)大腦皮質(zhì)正常發(fā)育及其異常導(dǎo)致的大腦畸形種類(lèi)的認(rèn)識(shí),同時(shí)也積累了大量臨床以及基礎(chǔ)研究數(shù)據(jù)并基于這些發(fā)現(xiàn)提出了許多假說(shuō)。限于臨床研究以及對(duì)病理標(biāo)本的基礎(chǔ)研究的局限性,合適的動(dòng)物模型是非常必要的補(bǔ)充,其不僅在驗(yàn)證臨床以及基礎(chǔ)研究的結(jié)果等方面發(fā)揮著非常重要的作用,其還為轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)的發(fā)展做出了巨大貢獻(xiàn)。在妊娠期給予甲基氧化偶氮甲醇(Methylazoxymethanol,MAM)處理的孕鼠的后代因具有與MCD患者相似的病理改變,分子生物學(xué)以及行為學(xué)改變而被認(rèn)為是很有前景的MCD模型并備受關(guān)注。糖皮質(zhì)激素受體(Glucocorticoid receptor,GR)和鹽皮質(zhì)激素受體(Mineralocorticoid receptor,MR)均屬于核受體超家族,其配體均為糖皮質(zhì)激素,對(duì)基因轉(zhuǎn)錄有調(diào)節(jié)作用,從而對(duì)細(xì)胞增殖,分化和凋亡程序進(jìn)行調(diào)控。對(duì)下丘腦-垂體-腎上腺軸(Hypothalamic pituitary adrenal axis,HPA)功能的維持有著非常重要的作用,且已證實(shí)多種疾病與其異常有關(guān)。癲癇是神經(jīng)系統(tǒng)常見(jiàn)疾病之一,其發(fā)生與HPA軸關(guān)系密切;MCD是癲癇的重要病因,且往往表現(xiàn)為難治性癲癇,對(duì)糖皮質(zhì)激素治療反應(yīng)差,而激素需與受體結(jié)合才能發(fā)揮作用,因此,受體異常是其可能原因。鑒于GR、MR的重要功能,我們推測(cè)GR、MR可能與MCD形成及其致癇機(jī)制有關(guān)。目的:運(yùn)用MAM誘導(dǎo)新型的MCD大鼠模型;研究其病理改變程度與其年齡的關(guān)系、癲癇發(fā)作易感性及癲癇發(fā)作對(duì)已存在的MCD病理形態(tài)的影響;研究GR和MR在MCD動(dòng)物模型大腦皮質(zhì)中的表達(dá),探討其在MCD形成及MCD致癇機(jī)制中的作用。方法:對(duì)妊娠15天的SD孕鼠間隔12小時(shí)給予二次腹腔注射MAM建立MCD模型,對(duì)照組給予生理鹽水處理;觀察子鼠的日常行為并在產(chǎn)后第90天時(shí)行頭皮腦電圖檢測(cè)。琉瑾-吉姆薩染色被運(yùn)用于顯示P0、7、14、28、60、90子鼠大腦皮質(zhì)與海馬結(jié)構(gòu),Neu N免疫熒光染色被運(yùn)用于顯示神經(jīng)元的分布。采用匹魯卡品誘導(dǎo)癲癇發(fā)作建立癲癇模型并研究癲癇發(fā)作對(duì)MCD病理形態(tài)的影響。利用Real Time-PCR(RT-PCR)、Western Blot技術(shù)分別檢測(cè)2月齡MCD模型病變大腦皮質(zhì)與對(duì)照組對(duì)應(yīng)部位大腦皮質(zhì)中GR、MR的m RNA和蛋白水平表達(dá)。結(jié)果:MAM組子鼠反應(yīng)遲鈍,活動(dòng)量減少。MAM組大腦皮質(zhì)尺寸較對(duì)照組明顯減少,其皮層變薄,上、下丘腦不能被枕葉完全覆蓋;對(duì)腦質(zhì)量分析發(fā)現(xiàn)除P0組外,其他組中MAM組腦質(zhì)量明顯輕于對(duì)照組。病理染色及免疫熒光染色顯示MAM組子鼠大腦皮質(zhì)較對(duì)照組變薄,其層狀結(jié)構(gòu)紊亂,皮質(zhì)和海馬內(nèi)出現(xiàn)團(tuán)塊狀的增殖結(jié)節(jié)、異位神經(jīng)元和胞體較大的異形神經(jīng)元,且鼠齡越長(zhǎng)病理改變?cè)矫黠@。MAM組癲癇易感性增高,給予較低劑量匹魯卡品即能出現(xiàn)全身強(qiáng)直發(fā)作,即Ⅳ-Ⅴ級(jí)癲癇樣發(fā)作,甚至癲癇持續(xù)狀態(tài),繼之偶有自發(fā)癲癇發(fā)作,病理檢查見(jiàn)肥大/異形的錐形神經(jīng)元,其皮質(zhì)發(fā)育異常的程度較單純MAM組加重。RT-PCR結(jié)果顯示MAM組大腦皮質(zhì)中的GR m RNA相對(duì)表達(dá)量較對(duì)照組顯著降低(p0.05),MR m RNA則無(wú)明顯差異;與RT-PCR結(jié)果一致,Western Blot結(jié)果顯示MAM組大腦皮質(zhì)中的GR蛋白表達(dá)較對(duì)照組顯著降低(p0.05),MR蛋白表達(dá)則無(wú)明顯差異。結(jié)論:對(duì)妊娠15天SD孕鼠給予二次腹腔注射MAM可成功建立MCD模型,其病理特征與MCD患者病理改變極為相似,且病變程度隨著鼠齡增長(zhǎng)而加重,提示MAM模型是研究MCD的適合模型;MAM組癲癇易感性增高,聯(lián)合匹魯卡品誘導(dǎo)癲癇發(fā)作后其病理改變程度較單純MAM組加重,提示基于MAM模型的匹魯卡品“二次打擊”法可能是建立基于MCD的癲癇患者的動(dòng)物模型的較佳方法;GR表達(dá)降低或GR/MR失衡可能與MAM組大鼠病理形態(tài)的形成、癲癇易感性增高有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：皮質(zhì)發(fā)育障礙 甲基氧化偶氮甲醇 大鼠模型 糖皮質(zhì)激素受體 鹽皮質(zhì)激素受體 癲癇
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R742;R-332
【目錄】：

• 縮略語(yǔ)表4-5
• 英文摘要5-8
• 中文摘要8-10
• 第一部分 前言10-11
• 第二部分 甲基氧化偶氮甲醇誘導(dǎo)皮質(zhì)發(fā)育障礙動(dòng)物模型的病理學(xué)研究11-25
• 2.1 材料與方法12-17
• 2.2 結(jié)果17-21
• 2.3 討論21-24
• 2.4 小結(jié)24-25
• 第三部分 糖皮質(zhì)激素受體和鹽皮質(zhì)激素受體在皮質(zhì)發(fā)育障礙動(dòng)物模型大腦皮質(zhì)中的表達(dá)25-36
• 3.1 材料與方法26-31
• 3.2 結(jié)果31-33
• 3.3 討論33-35
• 3.4 小結(jié)35-36
• 全文總結(jié)36-37
• 參考文獻(xiàn)37-44
• 文獻(xiàn)綜述 甲基氧化偶氮甲醇誘導(dǎo)皮質(zhì)發(fā)育障礙動(dòng)物模型的研究進(jìn)展44-59
• 參考文獻(xiàn)53-59
• 學(xué)習(xí)期間發(fā)表和待發(fā)表的論文59-60
• 致謝60

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