黑龍江立克次體（Rickettsia heilongjiangensis）屬于斑點熱群立克次體（spotted fever group rickettsiae,SFGR）,是遠東斑點熱（Far-eastern spotted fever, FESF）的病原體。黑龍江立克次體為專性胞內(nèi)寄生的革蘭氏陰性小桿菌,在保存宿主蜱中經(jīng)卵傳播,通過蜱的叮咬感染人。遠東斑點熱主要分布在我國的東北地區(qū)、俄羅斯的遠東地區(qū)以及日本部分地區(qū),在這些地區(qū),從病人和不同種類的蜱中都分離到了黑龍江立克次體,說明該病為該地區(qū)重要的新發(fā)傳染病。本研究通過空斑純化獲得黑龍江立克次體的單克隆菌株,使用Vero細胞擴大培養(yǎng)立克次體,通過泛影葡胺密度梯度離心純化菌體,通過實驗感染BALB/c小鼠,研究不同時相小鼠血液以及主要器官的立克次體的載量、病理損傷以及細胞因子水平,建立了黑龍江立克次體的BALB/c小鼠感染模型,為進一步揭示黑龍江立克次體的致病機制奠定了基礎。將冷凍保藏的黑龍江立克次體接種雞胚進行復蘇,并通過空斑法對黑龍江立克次體進行克隆。隨后,將克隆的立克次體在Vero細胞中大量繁殖和采用泛影葡胺不連續(xù)密度梯度離心法從... 

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【學位級別】：碩士

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縮略詞表
摘要
Abstract
前言
第一章 黑龍江立克次體的培養(yǎng)與純化
    1 材料
        1.1 菌株和雞胚
        1.2 主要試劑
        1.3 主要儀器
        1.4 主要試劑的配制
    2 方法
        2.1 菌種復蘇
        2.2 Gimenez 染色法鑒定立克次體
        2.3 間接免疫熒鑒定立克次體
        2.4 空斑克隆黑龍江立克次體
        2.5 黑龍江立克次體的分子鑒定
        2.6 Vero 細胞的培養(yǎng)
        2.7 立克次體單克隆菌株擴大培養(yǎng)
        2.8 泛影葡胺不連續(xù)密度梯度離心純化黑龍江立克次體
        2.9 實時熒光定量檢測黑龍江立克次體
        2.10 黑龍江立克次體活力測定
    3 結(jié)果
        3.1 黑龍江立克次體染色結(jié)果
        3.2 空斑克隆黑龍江立克次體
        3.3 黑龍江立克次體的鑒定
        3.4 黑龍江立克次體在Vero 細胞上培養(yǎng)
        3.5 泛影葡胺不連續(xù)密度梯度法純化黑龍江立克次體
        3.6 實時熒光定量檢測黑龍江立克次體
        3.7 黑龍江立克次體活力測定結(jié)果
    4 討論
第二章 黑龍江立克次體感染BALB/c 小鼠的研究
    1 材料
        1.1 主要試劑
        1.2 主要儀器
    2 方法
        2.1 實驗感染BALB/c 小鼠
        2.2 實驗樣品取材
        2.3 組織總DNA 的提取
        2.4 組織總RNA 的提取與逆轉(zhuǎn)錄
        2.5 組織病理觀察
        2.6 熒光定量PCR 檢測小鼠樣本中立克次體
        2.7 熒光定量PCR 檢測小鼠組織中IFN-γ、TNF-α、RANTES 的轉(zhuǎn)錄水平
        2.8 間接免疫熒光檢測小鼠血清特異性抗體水平
        2.9 統(tǒng)計方法
    3 結(jié)果
        3.1 病理損傷分析
        3.2 小鼠血液和器官中立克次體載量分析
        3.3 熒光定量PCR 分析小鼠組織中IFN-γ、TNF-α、RANTES 的轉(zhuǎn)錄水平
        3.4 間接免疫熒光分析小鼠血清特異性抗體水平
    4 討論
結(jié)論
參考文獻
綜述
    參考文獻
代表性論著
個人簡歷
致謝



本文編號：3658339