發(fā)布時(shí)間：2022-07-11 11:50

　　目的：探討坍塌反應(yīng)調(diào)節(jié)蛋白1（Collapsin response mediator protein 1, CRMP1）對大鼠海馬神經(jīng)元突起生長和細(xì)胞骨架的影響。材料和方法：化學(xué)合成3對靶向大鼠海馬神經(jīng)元CRMP1基因的siRNA,通過RT-PCR與實(shí)時(shí)熒光定量PCR篩選干擾CRMP1表達(dá)的siRNA,并用免疫細(xì)胞熒光和Western blot檢測CRMP1的表達(dá),然后合成5’端標(biāo)記FAM綠色熒光基團(tuán)篩選后的siRNA序列,陽離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染原代培養(yǎng)大鼠海馬神經(jīng)元,熒光顯微鏡下觀察綠色熒光在神經(jīng)元內(nèi)的表達(dá)部位并定時(shí)追蹤神經(jīng)元突起的生長,共聚焦顯微鏡觀察α-tubulin、CRMP5蛋白的重排與分布,蛋白印記檢測α-tubulin、CRMP5蛋白的表達(dá)量。結(jié)果：（1）轉(zhuǎn)染效率的檢測：陽離子脂質(zhì)體法將FAM標(biāo)記的陰性對照siRNA瞬時(shí)轉(zhuǎn)染大鼠海馬神經(jīng)元,流式細(xì)胞儀檢測轉(zhuǎn)染效率為52.5%。（2） CRMP1-siRNA的篩選：化學(xué)合成3對針對CRMP1基因的siRNAs序列,通過RT-PCR、實(shí)時(shí)熒光定量PCR、免疫細(xì)胞熒光和Western blot成功篩選出1對有效siRNA,其中CRMP... 

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
目錄
1 前言
    1.1 細(xì)胞骨架與神經(jīng)元突起生長
    1.2 CRMPs與神經(jīng)元突起生長
    1.3 目的和意義
2 材料與方法
    2.1 材料
    2.2 方法
    2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
3 結(jié)果
    3.1 原代培養(yǎng)海馬神經(jīng)元的形態(tài)學(xué)觀察
    3.2 CRMP1基因siRNA的篩選
    3.3 CRMP1-249 siRNA轉(zhuǎn)染大鼠海馬神經(jīng)元
4 討論
    4.1 CRMP1 siRNA的篩選
    4.2 干擾CRMP1基因表達(dá)對海馬神經(jīng)元突起生長的影響
    4.3 CRMP1通過調(diào)控細(xì)胞骨架參與神經(jīng)元突起生長
    4.4 CRMP1參與突起生長與CRMP5的關(guān)系
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
英文縮略詞表
在校期間發(fā)表論文
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]CRMP-1真核表達(dá)載體的構(gòu)建及其突起生長抑制作用[J]. 郭國慶,辛莉,邱小忠,沈偉哉,原林.  生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展. 2009(03)
[2]微管的生物學(xué)特性與藥物研究[J]. 李建農(nóng),蔣建東.  藥學(xué)學(xué)報(bào). 2003(04)



本文編號：3658110