目的克隆人ALOX5AP（Arachidonate 5-lipoxygenase activating protein）基因啟動(dòng)子區(qū)域并構(gòu)建熒光素酶報(bào)告基因表達(dá)載體,運(yùn)用生物信息學(xué)分析該序列并預(yù)測(cè)啟動(dòng)子候選區(qū)及轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)。方法 PCR擴(kuò)增ALOX5AP基因轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)上游2 000 bp的片段,將其連接至p GL3-Basic載體,構(gòu)建熒光素酶報(bào)告基因重組質(zhì)粒,MluⅠ與HindⅢ雙酶切及測(cè)序鑒定。采用Promoter 2. 0、CpGPlot、Ali Baba 2. 1等軟件對(duì)啟動(dòng)子及轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)進(jìn)行預(yù)測(cè)與分析。結(jié)果構(gòu)建了含有ALOX5AP基因啟動(dòng)子序列的重組質(zhì)粒,雙酶切與測(cè)序驗(yàn)證構(gòu)建成功。生物信息學(xué)分析表明ALOX5AP基因轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)上游2 000 bp有3個(gè)啟動(dòng)子候選區(qū),未發(fā)現(xiàn)CpG島;上游區(qū)域共發(fā)現(xiàn)245個(gè)潛在的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn),分布在啟動(dòng)子候選區(qū)內(nèi)的有Pit-1α、TBP、TBPWT1-κ、Sox-2等。結(jié)論成功構(gòu)建人ALOX5AP基因啟動(dòng)子熒光素酶報(bào)告基因表達(dá)載體,生物信息學(xué)分析鑒定出啟動(dòng)子候選區(qū),其中含有多個(gè)潛在的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn),為ALOX5AP基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控分... 

【文章來源】：泰山醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào). 2020,41(03)

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

p GL3-A2000的測(cè)序驗(yàn)證

Cp GPlot檢測(cè)結(jié)果

Meth Primer檢測(cè)結(jié)果


本文編號(hào)：3609715