目的克隆人ALOX5AP（Arachidonate 5-lipoxygenase activating protein）基因啟動子區(qū)域并構(gòu)建熒光素酶報告基因表達載體,運用生物信息學分析該序列并預(yù)測啟動子候選區(qū)及轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點。方法 PCR擴增ALOX5AP基因轉(zhuǎn)錄起始點上游2 000 bp的片段,將其連接至p GL3-Basic載體,構(gòu)建熒光素酶報告基因重組質(zhì)粒,MluⅠ與HindⅢ雙酶切及測序鑒定。采用Promoter 2. 0、CpGPlot、Ali Baba 2. 1等軟件對啟動子及轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點進行預(yù)測與分析。結(jié)果構(gòu)建了含有ALOX5AP基因啟動子序列的重組質(zhì)粒,雙酶切與測序驗證構(gòu)建成功。生物信息學分析表明ALOX5AP基因轉(zhuǎn)錄起始點上游2 000 bp有3個啟動子候選區(qū),未發(fā)現(xiàn)CpG島;上游區(qū)域共發(fā)現(xiàn)245個潛在的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點,分布在啟動子候選區(qū)內(nèi)的有Pit-1α、TBP、TBPWT1-κ、Sox-2等。結(jié)論成功構(gòu)建人ALOX5AP基因啟動子熒光素酶報告基因表達載體,生物信息學分析鑒定出啟動子候選區(qū),其中含有多個潛在的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點,為ALOX5AP基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控分... 

【文章來源】：泰山醫(yī)學院學報. 2020,41(03)

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

p GL3-A2000的測序驗證

Cp GPlot檢測結(jié)果

Meth Primer檢測結(jié)果


本文編號：3609715