赭曲霉毒素（Ochratoxin）是由曲霉菌屬（Aspergillus）和青霉菌屬（Penicillium）的某些種產(chǎn)生的次級代謝產(chǎn)物,包含7種結(jié)構(gòu)類似的化合物。其中赭曲霉毒素A（Ochratoxin A,OTA）毒性最強(qiáng),具有腎臟毒性、肝臟毒性及致畸、致癌和致突變等特性。納米抗體（Nanobody,Nb）又被稱為單域重鏈抗體（Variable domain of heavy chain antibody,VHH）,由天然缺失輕鏈的重鏈可變區(qū)構(gòu)成,是自然存在的可與抗原結(jié)合的最小片段,具有分子質(zhì)量小、易改造、易于表達(dá)以及穩(wěn)定性好等優(yōu)點。隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展與研究的深入,結(jié)合基因工程技術(shù)經(jīng)過改造攜帶特定結(jié)構(gòu)的納米抗體具有更加明顯的優(yōu)勢,如多價納米抗體、融合型納米抗體、多特異性納米抗體等均具有未改造前納米抗體所沒有的特性,為建立更加靈敏的檢測方法提供了基礎(chǔ)。免疫親和柱技術(shù)是通過存在于生物體抗原和抗體之間的高度特異性和親和力,來達(dá)到分離純化的一種方法。與其他提取方法比較,免疫親和柱技術(shù)具有有毒試劑使用少、方便簡潔、有效排除基質(zhì)干擾等優(yōu)點。本研究基于原核表達(dá)載體pET-CTB-VHH28,將其轉(zhuǎn)化... 

【文章來源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

赭曲霉毒素A的化學(xué)結(jié)構(gòu)式

體抗原和抗體之間的高度特異性和親和力，來達(dá)到分離純化的一種方法。與其他提取方法比較，免疫親和柱凈化技術(shù)還有其他優(yōu)勢。主要表現(xiàn)：提取時避免使用有毒有機(jī)溶劑，減少對操作人員的損害；方便快捷，簡化了前處理步驟；由于凈化處理徹底，減少了基質(zhì)中的雜質(zhì)干擾，數(shù)據(jù)更加可靠。目前免疫親和柱的制備通常是選用免疫球蛋白 G（Immunoglobulin G，IgG），將其與載體進(jìn)行偶聯(lián)，從而制備成相應(yīng)的免疫親和柱。親和柱的制備主要分為以下步驟：載體材料的選擇、材料的活化、配體的偶聯(lián)、封閉多余位點，最后進(jìn)行清洗保存。其中材料的活化效果與配體偶聯(lián)的過程對親和柱的性能起著決定性作用。親和柱載體種類繁多，常用的載體有三大類：瓊脂糖凝膠、纖維素、有機(jī)基體（如聚丙烯酰胺凝膠和聚乙烯凝膠等）。載體活化的原理是要在載體骨架上引入強(qiáng)親電的基團(tuán)，這些基團(tuán)可以與抗體上親核基團(tuán)-NH2、-OH、-SH 等發(fā)生取代反應(yīng)，從而使抗體可以成功的連接在載體上[30]�，F(xiàn)如今常用的載體活化方式包括環(huán)氧活化、溴化氰活化以及戊二醛活化等，溴化氰活化的瓊脂糖是通常被選用的親和柱載體材料[31]。其原理如下圖 1-2 所示。

圖 1-3 抗體結(jié)構(gòu)示意圖Fig.1-3 Schematic structural diagram of an antibodyA-傳統(tǒng)四鏈結(jié)構(gòu)抗體；B-駱駝血液中的重鏈抗體；C-納米抗體A-Conventional IgG；B-Heavy-chain IgG；C-Nanobody納米抗體為單域抗體，故其和 IgG 比較具有一些獨(dú)特的性質(zhì)，因其內(nèi)半胱氨酸，分子間會形成牢固的二硫鍵，使 VHH 的穩(wěn)定性得到極大地VHH 具有傳統(tǒng)抗體的高親和性、高特異性等優(yōu)點，因其分子量小的緣故有效的穿透組織并識別傳統(tǒng)抗體所不能識別的或者隱藏的抗原表位，抗原識別能力強(qiáng)。VHH 通常是由抗體庫中篩選而來，對篩選到的 V行免疫學(xué)實驗分析，結(jié)果表明其大都都具有較高的親和力和較好的特對 VHH 的互補(bǔ)決定區(qū)（Complementarity-determining region，CDR）3抗體 CDR3 對比分析可知，這兩者之間具有高度的同源性，故其免疫，可以將 VHH 用于臨床醫(yī)學(xué)治療。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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