目的構(gòu)建含有人呼吸道合胞病毒（human respiratory syncytial virus,hRSV）核蛋白（nucleoprotein,N）、磷蛋白（phosphoprotein,P）和轉(zhuǎn)錄延長/終止抑制因子（transcription elongation/antitermination factor M2-1,M2-1）蛋白編碼基因的表達(dá)載體,并轉(zhuǎn)染BSR T7/5細(xì)胞,鑒定蛋白的表達(dá)。方法根據(jù)hRSV蘭州株（LZ01/09）的N、P和M2-1基因序列設(shè)計(jì)3對特異性引物,以pcDNA-N、pcDNA-P和pcDNA-M2-1質(zhì)粒為模板,PCR擴(kuò)增N、P和M2-1基因片段,與pGEM-T載體連接,構(gòu)建亞克隆載體;再通過體外酶切連接將內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(diǎn)（internal ribosome entry site,IRES）序列克隆至p RSV7載體T7啟動(dòng)子表達(dá)盒基因的上游,構(gòu)建基本表達(dá)載體p7IK;通過酶切連接構(gòu)建表達(dá)載體p7IK-N、p7IK-P和p7IK-M2-1,轉(zhuǎn)染BSR T7/5細(xì)胞,采用Western blot法鑒定蛋白的表達(dá)。結(jié)果亞克隆載體、基本表達(dá)載體和表達(dá)載體... 

【文章來源】：中國生物制品學(xué)雜志. 2019,32(11)CSCD

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 細(xì)胞及質(zhì)粒
    1.2 主要試劑
    1.3 引物設(shè)計(jì)及合成
    1.4 N、P、M2-1基因的擴(kuò)增及克隆
    1.5 基本表達(dá)載體的構(gòu)建
    1.6 表達(dá)載體的構(gòu)建
    1.7 細(xì)胞轉(zhuǎn)染及蛋白表達(dá)的檢測
2 結(jié)果
    2.1 亞克隆載體的鑒定
    2.2 基本表達(dá)載體的鑒定
    2.3 表達(dá)載體的鑒定
3 討論



本文編號：3604071