目的:獲得性免疫缺陷綜合征又稱之為艾滋病（AIDS）目前已奪走了全世界2500多萬人的生命,已然成為危害人類生命的四大殺手之一。近年來,臨床常規(guī)使用最多的是高效的抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療（HAART）,但因其價格昂貴、病人難以承受而導(dǎo)致依從性差、副作用大等,并且不能完全清除病毒。HIV分為:HIV-1和HIV-2,目前主要流行的是HIV-1。所以,研發(fā)并設(shè)計出安全有效的抗艾滋病病毒1型（HIV-1）疫苗顯得尤為迫切。研究發(fā)現(xiàn),CD8⁺毒性T細胞（CTL）對于控制HIV-1的復(fù)制發(fā)揮著重要的作用,當(dāng)今以CTL為基礎(chǔ)研制針對HIV-1疫苗成為熱點之一。因此,本文主要研究CTL的抗HIV-1病毒功能,以期能明確CTL的抗病毒作用機制;同時研究CTL、抗體和NK細胞抗病毒的相對貢獻以及協(xié)同作用,為疫苗研發(fā)提供重要信息。我們將從4個方面對其抗病毒機制進行研究:第一,通過體外增殖試驗研究影響人免疫缺陷病毒1型（HIV-1）特異性的CTL增殖反應(yīng)的因素;第二,應(yīng)用不同的抗原肽直接刺激HIV-1特異性CTL克隆細胞株以檢測其抗病毒功能;第三,比較識別同一抗原表位的不同CTL克隆的抗病毒功... 

【文章來源】：江蘇大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：95 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

HIV-1基因組全長圖

車 樣承載著抗原肽。然后與 CFSE 熒光標(biāo)記的 CD8+陰性對照組（不加抗原肽刺激）：在不添加抗原肽的條/L CFSE 熒光標(biāo)記 5×106的細胞，同等條件下與其他各培上述步驟中細胞最后培養(yǎng)濃度均為 2×106/ml。計學(xué)處理 Graphpad Prism 5.0 軟件進行統(tǒng)計學(xué)的處理，P < 0.05 被義的。結(jié)果MCs 的分離 Ficoll 液將單個核細胞從外周血中分離出來，離心后可觀下圖 3.1 所示：處于上層和中層之間的 層白色云霧細帶細胞（PBMCs）。

HIV-1 感染免疫保護機制的研究3.4.2. 流式實驗分析用流式細胞儀檢測少量磁珠分離后的 CD8+T 細胞，以明確其分離濃度。首先從 PBMCs 中分離出 CD8+T 細胞（圖 3.2 A），使用流式細胞術(shù)檢測到純度為97%。然后通過 HIV-1 Tetramer 染色從總的 CD8+T 細胞中分離出 HIV-1 特異性CD8+T 細胞（CTL），比例為 4.12%(圖 3.2 B)，培養(yǎng)后第 7 天，3 個抗原肽刺激組的 CFSE 標(biāo)記的 CTL 都得到了增殖活化�？乖闹苯哟碳そM（圖 3.2 C）和抗原肽刺激 2 小時組（圖 3.2 D）均有非常明顯的 3 個分裂峰。而 APCs 呈遞抗原肽刺激組（圖 3.2 E）出現(xiàn)了 4 個明顯的分裂峰，因為早在培養(yǎng)的第 4 天，APCs呈遞抗原肽刺激組就已經(jīng)開始出現(xiàn)增殖。說明初始 CTL 細胞在混合培養(yǎng)中都得到了增殖活化。

【參考文獻】：
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碩士論文
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本文編號：3583077