目的構建艱難梭菌二元毒素（Cdt）A的原核表達載體,表達并純化His-CdtA重組蛋白,分析其免疫原性。方法以RT 027型艱難梭菌為模板,采用聚合酶鏈反應（PCR）擴增cdtA的全長序列,導入大腸埃希菌BL21感受態(tài)細胞,誘導His-CdtA重組蛋白表達,并用純化后的蛋白免疫小鼠,分析小鼠產(chǎn)生的抗體效價。結果成功構建pET-28b-cdtA原核表達載體,誘導并純化出高濃度的His-CdtA重組蛋白,免疫小鼠后產(chǎn)生高效價的抗CdtA抗體。結論純化的His-CdtA重組蛋白免疫小鼠產(chǎn)生了高效價的抗CdtA抗體,為后續(xù)制備抗CdtA單克隆抗體及建立CdtA的實驗室檢測方法學奠定了基礎。 

【文章來源】：檢驗醫(yī)學. 2020,35(02)

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

菌液PCR鑒定pET-28b-cdtA的瓊脂糖凝膠電泳圖

收集各濃度咪唑洗脫液行S D S-PAG E（圖5）。上樣穿透液（泳道2）目的蛋白明顯減少，說明His-Cdt A重組蛋白已成功與鎳柱結合，當洗脫液咪唑濃度為10 m mol/L時能有效洗脫雜蛋白（泳道3），直到濃度達到200 mmol/L時才能成功洗下目的蛋白（泳道6）。最終確定本研究His-CdtA重組蛋白的最佳純化條件為：咪唑濃度為10 mmol/L時洗脫雜蛋白，咪唑濃度為200 mmol/L時完全洗脫His-CdtA目的蛋白。另外，pET-28b自身攜帶His標簽，用相同條件表達純化后雖然也有低濃度的蛋白被純化，但與His-CdtA目的蛋白大小不一致（圖4），進一步驗證His-CdtA重組蛋白非載體自身表達蛋白。圖4 鎳柱親和層析純化產(chǎn)物的SDS-PAGE圖

鎳柱親和層析純化產(chǎn)物的SDS-PAGE圖

【參考文獻】：
期刊論文
[1]老年人群分離艱難梭菌分子型別特征研究[J]. 張文竹,閆中強,李文革,周玉,龔美亮,徐雅萍,吳媛,盧金星.  中華醫(yī)院感染學雜志. 2018(08)
[2]艱難梭菌毒力與芽孢研究進展[J]. 劉思娣,吳安華.  中國感染控制雜志. 2016(06)



本文編號：3574300