本文關(guān)鍵詞：敲除星形膠質(zhì)細(xì)胞的dicer對中樞神經(jīng)系統(tǒng)的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：星形膠質(zhì)細(xì)胞是脊椎動物中樞系統(tǒng)中的一種大量存在的細(xì)胞,占中樞神經(jīng)系統(tǒng)細(xì)胞總量的80%以上。在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中,星形膠質(zhì)細(xì)胞起到了非常重要的作用,其中包括構(gòu)建血腦屏障,為神經(jīng)元神經(jīng)組織提供營養(yǎng),維持細(xì)胞外的離子平衡,在中樞神經(jīng)組織的損傷修復(fù)中參與形成膠質(zhì)瘢痕。dicer是一種核糖核苷酸內(nèi)切酶,在人類體內(nèi)是由DICER1基因編碼產(chǎn)生的Dicer屬于RNA酶III家族,Dicer能夠切割雙鏈RNA(dsRNA)和小RNA前體,將他們切割成小片段的雙鏈RNA,我們分別稱之為小干擾RNA,以及micro-RNA30。這種雙鏈的小片段RNA通常是由20-25個堿基對外帶兩個堿基的突出3’末端堿基組成32。Dicer促進(jìn)RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合物(RISC)的激活,這種復(fù)合物的激活對于RNA干擾起著至關(guān)重要的作用32。我們之前的研究表明,在神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育的早期,敲除星形膠質(zhì)細(xì)胞中的dicer對星形膠質(zhì)細(xì)胞的發(fā)育起著至關(guān)重要的作用。以人的GFAP啟動子啟動的Cre的表達(dá)能條件性敲除GFAP陽性細(xì)胞中的Dicer的生成,從而影響miRNA的成熟。星形膠質(zhì)細(xì)胞中成熟miRNA的缺失雖然不會影響星形膠質(zhì)細(xì)胞的產(chǎn)生,甚至不會影響星形膠質(zhì)細(xì)胞遷移到既定的目標(biāo)位置,但是缺少miRNA會導(dǎo)致星形膠質(zhì)細(xì)胞的成熟延遲。而為了進(jìn)一步搞清GFAP陽性星形膠質(zhì)細(xì)胞中的dicer在成熟的中樞神經(jīng)系統(tǒng)的作用,我們使用了以小鼠GFAP啟動子啟動的Cre表達(dá)條件性敲除的GFAP陽性細(xì)胞中的dicer。通過對小鼠脊髓切片,大腦切片的檢測,發(fā)現(xiàn)在小鼠的神經(jīng)系統(tǒng)成熟后,星形膠質(zhì)細(xì)胞dicer對中樞神經(jīng)系統(tǒng)的穩(wěn)態(tài)起到了至關(guān)重要的作用。
【關(guān)鍵詞】：星形膠質(zhì)細(xì)胞 dicer 脊髓 大腦 髓鞘 少突膠質(zhì)細(xì)胞 神經(jīng)元
【學(xué)位授予單位】：杭州師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R338
【目錄】：

• 致謝5-6
• 摘要6-7
• Abstract7-12
• 綜述12-22
• 1.1 引言12
• 1.2 與星形膠質(zhì)細(xì)胞有關(guān)的病理過程12-15
• 1.3 星形膠質(zhì)細(xì)胞與髓鞘化的形成15-18
• 1.4 認(rèn)識dicer18-20
• 1.4.1 dicer的基本功能18
• 1.4.2 dicer的發(fā)現(xiàn)歷史18-19
• 1.4.3 dicer的在RNA干擾中的作用19-20
• 1.5 Dicer在神經(jīng)系統(tǒng)中的功能及作用20-22
• 2.實(shí)驗(yàn)的內(nèi)容與設(shè)計(jì)22-25
• 2.1 實(shí)驗(yàn)的目的與意義22-23
• 2.2 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容23-24
• 2.3 試驗(yàn)流程圖24-25
• 3. 試驗(yàn)試劑與方法25-37
• 3.1 實(shí)驗(yàn)動物飼養(yǎng)與基因型鑒定25-27
• 3.1.1 材料25
• 3.1.2 實(shí)驗(yàn)用小鼠基因型25-26
• 3.1.3 小鼠基因型鑒定方法26-27
• 3.2 試劑與配方27-31
• 3.3 試驗(yàn)方法31-37
• 3.3.1 感受態(tài)細(xì)胞制備與連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化31
• 3.3.2 總RNA提取與cDNA的獲得31-32
• 3.3.3 基因克隆與載體構(gòu)建32-33
• 3.3.4 原位雜交探針的制備33-34
• 3.3.5 小鼠材料的準(zhǔn)備34
• 3.3.6 免疫熒光試驗(yàn)方法34-35
• 3.3.7 原位雜交35-36
• 3.3.8 電鏡材料的處理方法36-37
• 4. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果37-50
• 4.1 小鼠基因型鑒定37-38
• 4.2 敲除GFAP陽性的星形膠質(zhì)細(xì)胞對脊髓的影響38-40
• 4.3 大腦中micro-RNA對星形膠質(zhì)細(xì)胞的影響40-42
• 4.4 星形膠質(zhì)細(xì)胞micro-RNA對大腦髓鞘的影響42-47
• 4.5 星形膠質(zhì)細(xì)胞micro-RNA對大腦皮層神經(jīng)元的影響47-50
• 5. 總結(jié)與討論50-52
• 5.1 實(shí)驗(yàn)總結(jié)50-51
• 5.2 討論51-52
• 參考文獻(xiàn)52-56
• 個人簡介56

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本文編號：355787