本文關(guān)鍵詞：卵巢切除術(shù)構(gòu)建骨關(guān)節(jié)炎動物模型的可行性研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景骨關(guān)節(jié)炎(osteoarthritis,OA)是一種以關(guān)節(jié)軟骨退行性變及繼發(fā)性滑膜炎癥為特征的骨骼系統(tǒng)疾病,以中老年人常見。流行病學(xué)研究表明,50歲以前,男性的骨關(guān)節(jié)炎發(fā)病率略高于女性;50歲以后,女性的發(fā)病率顯著高于男性。大量研究表明,絕經(jīng)后女性失去雌激素保護和關(guān)節(jié)炎癥細胞因子水平異常在骨關(guān)節(jié)炎的發(fā)病中起著重要作用。另外,雌激素替代治療(estrogen-replacement therapy,ERT)對骨關(guān)節(jié)炎癥狀有一定的緩解作用,也說明了雌激素與絕經(jīng)后骨關(guān)節(jié)炎的發(fā)生可能存在相關(guān)性。骨質(zhì)疏松癥(Osteoporosis,OP)是一種退行性骨骼系統(tǒng)代謝疾病,以單位體積內(nèi)骨量低于正常、骨強度降低而脆性增加為特征,主要表現(xiàn)為全身骨量減少、骨的顯微結(jié)構(gòu)紊亂導(dǎo)致骨的脆性增加,容易發(fā)生骨折。其病因也十分復(fù)雜,但與骨關(guān)節(jié)炎相同的是,骨質(zhì)疏松癥也多發(fā)于絕經(jīng)后婦女和老年人。卵巢切除術(shù)(Ovariectomy,OVX)建立骨質(zhì)疏松的動物模型,研究較為成熟。而目前骨關(guān)節(jié)炎的動物模型多采用手術(shù)方法構(gòu)建,如前交叉韌帶橫斷術(shù)、內(nèi)側(cè)半月板切除術(shù)等,通過改變關(guān)節(jié)周圍應(yīng)力,導(dǎo)致關(guān)節(jié)不穩(wěn)定,從而誘發(fā)骨關(guān)節(jié)炎;但是由于此類模型屬關(guān)節(jié)內(nèi)干預(yù),加上手術(shù)造成的關(guān)節(jié)內(nèi)出血、創(chuàng)傷及炎癥影響,不能很好的模擬絕經(jīng)后骨關(guān)節(jié)炎的自然發(fā)生發(fā)展過程。本實驗擬通過關(guān)節(jié)外干預(yù),觀察雌激素缺乏在骨關(guān)節(jié)炎和骨質(zhì)疏松癥發(fā)生過程中的作用,并且通過對骨關(guān)節(jié)炎相關(guān)細胞因子檢測,探所這一過程發(fā)生的分子機制。研究目的1.驗證卵巢切除這一關(guān)節(jié)外干預(yù)方式,能否用來構(gòu)建骨關(guān)節(jié)炎動物模型;2.模型建立后,提取并培養(yǎng)骨關(guān)節(jié)炎軟骨細胞,加入雌激素干預(yù),檢測MMP-3、MMP-13、ADAMTS-5三種蛋白水解酶表達水平的改變,觀察雌激素在這一過程中的作用。研究方法1.選擇6月齡雌性SD大鼠行雙側(cè)卵巢切除術(shù),構(gòu)建骨關(guān)節(jié)炎動物模型。2.采用顯微鏡下大體觀察,系統(tǒng)評分,以及對關(guān)節(jié)組織進行番紅固綠染色行組織學(xué)觀察,評價模型質(zhì)量。3.用酶兩步法提取模型動物骨關(guān)節(jié)炎軟骨細胞及正常雌性大鼠關(guān)節(jié)軟骨細胞,并對關(guān)節(jié)炎軟骨細胞施加雌激素干預(yù),熒光實時定量PCR檢測MMP-3、MMP-13、ADAMTS-5基因在各組細胞中的相對表達量。4.Western blot檢測MMP-3、MMP-13、ADAMTS-5在三組軟骨細胞中的蛋白表達量。實驗結(jié)果1.采用卵巢切除術(shù)構(gòu)建骨關(guān)節(jié)炎動物模型,其關(guān)節(jié)軟骨病變程度達到骨關(guān)節(jié)炎診斷標(biāo)準(zhǔn)。2.提取關(guān)節(jié)軟骨細胞進行原代培養(yǎng),傳代后提純,采用熒光實時定量PCR檢測MMP-3、MMP-13、ADAMTS-5基因在骨關(guān)節(jié)炎軟骨細胞中的表達水平,結(jié)果顯示MMP-3表達量明顯增高,與對照組相比P0.05;MMP-13、ADAMTS-5的表達呈下降趨勢,與對照組相比P0.05。3.Western blot結(jié)果顯示,MMP-3、MMP-13、ADAMTS-5在骨關(guān)節(jié)炎軟骨細胞的分泌表達趨勢與上述結(jié)果一致。4.在骨關(guān)節(jié)炎培養(yǎng)液中加入雌激素干預(yù)后,可以改變骨關(guān)節(jié)炎軟骨細胞MMP-3、MMP-13的表達水平,使其趨向正常軟骨細胞。結(jié)論1.卵巢切除術(shù)可以用來建立骨關(guān)節(jié)炎的動物模型,以模擬絕經(jīng)后女性骨關(guān)節(jié)炎的自然發(fā)生過程。2.與正常關(guān)節(jié)軟骨細胞相比,MMP-3在骨關(guān)節(jié)炎軟骨細胞中明顯表達增加,提示其與骨關(guān)節(jié)炎的發(fā)生呈正相關(guān),這與文獻報道的結(jié)果一致;而MMP-13、ADAMTS-5表達水平降低,和依靠改變關(guān)節(jié)周圍應(yīng)力構(gòu)建的動物模型的分子表達水平有差異,提示其與采用卵巢切除構(gòu)建的骨關(guān)節(jié)炎動物模型可能存在發(fā)生機制上的差異。3.在細胞水平上,雌激素能夠在一定程度上逆轉(zhuǎn)骨關(guān)節(jié)炎軟骨細胞MMP-3、MMP-13的表達,提示雌激素對關(guān)節(jié)軟骨細胞具有保護作用。
【關(guān)鍵詞】：骨關(guān)節(jié)炎 雌激素 軟骨細胞 骨質(zhì)疏松 MMP ADAMTS-5
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R684.3;R-332
【目錄】：

• 縮略語表5-7
• 中文摘要7-10
• ABSTRACT10-13
• 前言13-15
• 文獻回顧15-28
• 1 骨關(guān)節(jié)炎15-24
• 1.1 骨關(guān)節(jié)炎概述15
• 1.2 組織學(xué)改變15-17
• 1.3 骨關(guān)節(jié)炎的發(fā)病機制17-20
• 1.4 相關(guān)炎性因子20-24
• 2. 骨關(guān)節(jié)炎與骨質(zhì)疏松的關(guān)系24-25
• 2.1 概述24-25
• 2.2 骨關(guān)節(jié)炎與骨質(zhì)疏松的相關(guān)性25
• 3. 骨關(guān)節(jié)炎的動物模型25-28
• 3.1 手術(shù)造模26-27
• 3.2 非手術(shù)造模27-28
• 實驗一 卵巢切除術(shù)構(gòu)建大鼠骨關(guān)節(jié)炎合并骨質(zhì)疏松模型的可行性28-38
• 1 材料與方法28-33
• 2 結(jié)果33-35
• 3 討論35-38
• 實驗二 雌激素對卵巢切除所致骨關(guān)節(jié)炎軟骨細胞的作用探究38-50
• 1 主要儀器和試劑38-39
• 2 大鼠關(guān)節(jié)軟骨細胞的原代培養(yǎng)及雌激素干預(yù)39-41
• 3 各實驗組MMP-3、MMP-13、ADAMT-5 基因表達的PCR檢測41-46
• 4 各實驗組MMP-3、MMP-13、ADAMT-5 含量的Western Blot檢測46-48
• 5 討論48-50
• 小結(jié)50-51
• 參考文獻51-60
• 個人簡歷及研究成果60-61
• 致謝61

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本文編號：350415