采用免疫組化法、直接測(cè)序法、焦磷酸測(cè)序法分別對(duì)彌漫性腦膠質(zhì)瘤患者異檸檬酸脫氫酶1（IDH1）第132位精氨酸的突變進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果表明:3種方法對(duì)高頻突變的檢出一致性為90.62%,免疫組化只能檢測(cè)出R132H突變類型,而兩種測(cè)序方法都能檢測(cè)出R132-其他類型的突變;焦磷酸測(cè)序檢出靈敏度最高達(dá)3%,直接測(cè)序法最經(jīng)濟(jì)和簡(jiǎn)便,但靈敏度低,僅能檢測(cè)突變率為20%以上的突變。建議先用免疫組化和直接測(cè)序初篩IDH1基因突變,對(duì)發(fā)現(xiàn)的低頻突變用焦磷酸測(cè)序驗(yàn)證。 

【文章來(lái)源】：實(shí)驗(yàn)技術(shù)與管理. 2019,36(10)北大核心

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【部分圖文】：

免疫組化結(jié)果

趙煥英，等：免疫組化和直接測(cè)序以及焦磷酸測(cè)序?qū)DH1突變的比較研究75免疫組化結(jié)果為陰性；其余15例IDHlR132H免疫組織化陽(yáng)性，4例為強(qiáng)陽(yáng)性，6例為陽(yáng)性，3例為弱陽(yáng)性，見(jiàn)圖1。A-強(qiáng)陽(yáng)性；B-陽(yáng)性；C-弱陽(yáng)性；D-陰性。圖1免疫組化結(jié)果3.2焦磷酸測(cè)序與直接測(cè)序結(jié)果利用含生物素標(biāo)記的IDH1引物樣本DNA經(jīng)毛細(xì)管電泳檢測(cè)條帶單一且大小為141bp，繼而進(jìn)行生物素單鏈的獲取，于PyroMarkQ24測(cè)序儀上利用測(cè)序引物引導(dǎo)序列測(cè)定。圖2為焦磷酸測(cè)序結(jié)果，圖2中E—H對(duì)應(yīng)圖1的A—D。圖2中E顯示CAT占86%，遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于CGT14%，跟圖1A顯示強(qiáng)陽(yáng)性結(jié)果一致，圖2中F對(duì)應(yīng)圖1B中陽(yáng)性結(jié)果，CAT占55%，圖2中G對(duì)應(yīng)圖1中C陽(yáng)性，CAT占21%，圖2中H中CAT檢測(cè)1%，對(duì)應(yīng)圖1中D陰性免疫組化，一般商用的PyroMark檢測(cè)試劑盒，其靈敏度都建議設(shè)在5%~10%之間，如MGMT[10]，不同的研究者針對(duì)IDH1132位點(diǎn)建立焦磷酸測(cè)序方法也有很多，報(bào)道的靈敏度一般不超過(guò)5%[11-12]，有研究者檢測(cè)靈敏度，甚至達(dá)到2%[13]。本方法建立中，構(gòu)建IDH1野生和突變質(zhì)粒，經(jīng)過(guò)數(shù)字PCR絕對(duì)定量后，按比例兩者混合，檢測(cè)到突變靈敏度為3%。這可能與擴(kuò)增產(chǎn)物的長(zhǎng)度不同、標(biāo)記的生物素位置不同、擴(kuò)增產(chǎn)物的純度不同、及測(cè)序引物不同導(dǎo)致的檢測(cè)靈敏度會(huì)有差異。圖3為直接測(cè)序結(jié)果。圖2焦磷酸測(cè)序結(jié)果圖3直接測(cè)序結(jié)果

趙煥英，等：免疫組化和直接測(cè)序以及焦磷酸測(cè)序?qū)DH1突變的比較研究75免疫組化結(jié)果為陰性；其余15例IDHlR132H免疫組織化陽(yáng)性，4例為強(qiáng)陽(yáng)性，6例為陽(yáng)性，3例為弱陽(yáng)性，見(jiàn)圖1。A-強(qiáng)陽(yáng)性；B-陽(yáng)性；C-弱陽(yáng)性；D-陰性。圖1免疫組化結(jié)果3.2焦磷酸測(cè)序與直接測(cè)序結(jié)果利用含生物素標(biāo)記的IDH1引物樣本DNA經(jīng)毛細(xì)管電泳檢測(cè)條帶單一且大小為141bp，繼而進(jìn)行生物素單鏈的獲取，于PyroMarkQ24測(cè)序儀上利用測(cè)序引物引導(dǎo)序列測(cè)定。圖2為焦磷酸測(cè)序結(jié)果，圖2中E—H對(duì)應(yīng)圖1的A—D。圖2中E顯示CAT占86%，遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于CGT14%，跟圖1A顯示強(qiáng)陽(yáng)性結(jié)果一致，圖2中F對(duì)應(yīng)圖1B中陽(yáng)性結(jié)果，CAT占55%，圖2中G對(duì)應(yīng)圖1中C陽(yáng)性，CAT占21%，圖2中H中CAT檢測(cè)1%，對(duì)應(yīng)圖1中D陰性免疫組化，一般商用的PyroMark檢測(cè)試劑盒，其靈敏度都建議設(shè)在5%~10%之間，如MGMT[10]，不同的研究者針對(duì)IDH1132位點(diǎn)建立焦磷酸測(cè)序方法也有很多，報(bào)道的靈敏度一般不超過(guò)5%[11-12]，有研究者檢測(cè)靈敏度，甚至達(dá)到2%[13]。本方法建立中，構(gòu)建IDH1野生和突變質(zhì)粒，經(jīng)過(guò)數(shù)字PCR絕對(duì)定量后，按比例兩者混合，檢測(cè)到突變靈敏度為3%。這可能與擴(kuò)增產(chǎn)物的長(zhǎng)度不同、標(biāo)記的生物素位置不同、擴(kuò)增產(chǎn)物的純度不同、及測(cè)序引物不同導(dǎo)致的檢測(cè)靈敏度會(huì)有差異。圖3為直接測(cè)序結(jié)果。圖2焦磷酸測(cè)序結(jié)果圖3直接測(cè)序結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]異檸檬酸脫氫酶1基因突變焦磷酸測(cè)序檢測(cè)方法的建立[J]. 王丹慧,蔡彥寧,張燕莉,高杰,楊彩俠.  首都醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2014(02)



本文編號(hào)：3503068