目的:探討巨噬細(xì)胞集落刺激因子（monocyte colony-stimulating factor,M-CSF）在SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）中過表達(dá)對破骨細(xì)胞分化形成相關(guān)細(xì)胞因子在信號通路中表達(dá)的影響。方法:構(gòu)建過表達(dá)質(zhì)粒載體上調(diào)M-CSF基因表達(dá),使用增強(qiáng)型綠色熒光蛋白確定最佳轉(zhuǎn)染劑量,并將質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至BMSCs。采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（reverse transcriptase polymerase chain reaction,RT-PCR）檢測破骨分化特異標(biāo)志物M-CSF、核因子-κB受體活化因子配體（receptor activator of nuclear factor-kappaB ligand,RANKL）、腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-alpha,TNF-α）、白細(xì)胞介素-1（interleukin-1,IL-1）、白細(xì)胞介素-6（interleukin-6,IL-6）、白細(xì)胞介素-24（interleukin-24,IL-24）的mRNA表達(dá)水平。結(jié)果... 

【文章來源】：口腔醫(yī)學(xué)研究. 2019,35(11)北大核心

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圖１ＢＭＳＣｓ的培養(yǎng)（×５）１ａ：原代細(xì)胞；１ｂ：第３代細(xì)胞

下觀察，呈分布均勻的魚群狀或漩渦狀長梭形細(xì)胞群貼壁生長。流式細(xì)胞鑒定其表面標(biāo)志物ＣＤ２９陽性率為９１．４％、ＣＤ４４陽性率為８５．７％；ＣＤ４５陽性率為２％，呈陰性表達(dá)，證實(shí)觀察細(xì)胞為ＢＭＳＣｓ（圖１）。１ａ：原代細(xì)胞；１ｂ：第３代細(xì)胞圖１ＢＭＳＣｓ的培養(yǎng)（×５）Ｆｉｇ．１ＴｈｅｐｒｉｍａｒｙｃｕｌｔｕｒｅｏｆＢＭＳＣｓ（×５）２．２質(zhì)粒提�。合拗菩詢�(nèi)切酶將環(huán)狀質(zhì)粒打開為線性驗(yàn)證質(zhì)粒載體大�。ǎ担矗耄�，圖２）圖２重組質(zhì)粒電泳圖Ｆｉｇ．２Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓｏｆｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｐｌａｓｍｉｄ．２．３轉(zhuǎn)染細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)ＣＣＫ－８實(shí)驗(yàn)在２４、３６、４８ｈ時檢測轉(zhuǎn)染后細(xì)胞活性發(fā)現(xiàn)：９μＬＬＴＸ試劑時，細(xì)胞活力均明顯低于７μＬ組及５μＬ組（Ｐ＜０．０５），且鏡下觀察細(xì)胞死亡最多。７μＬ組相對于５μＬ組細(xì)胞活力也下降（Ｐ＜０．０５）。根據(jù)轉(zhuǎn)染率和死亡率比值，選�。郸蹋剔D(zhuǎn)染３６ｈ為宜（圖３）。圖３ＣＣＫ－８檢測３組細(xì)胞細(xì)胞活力Ｆｉｇ．３ＤｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｃｅｌｌｖｉａｂｉｌｉｔｙｉｎｔｈｒｅｅｇｒｏｕｐｓｂｙＣＣＫ－８．２．４細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率通過激光共聚焦顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染后ＥＧＦＰ綠色熒光數(shù)量，當(dāng)ＬＴＸ＞５μＬ時，ＥＧＦＰ綠色熒光隨劑量增加而減少；３６ｈ后，Ｍ－ＣＳＦ過表達(dá)質(zhì)粒熒光數(shù)量約８５％，陰性對照質(zhì)粒熒光表達(dá)數(shù)量約７８％，此時兩組細(xì)胞密度約６５％（圖４）。２．５ＲＴ－ＰＣＲ實(shí)驗(yàn)組Ｍ－Ｃ

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]高脂飲食對去卵巢大鼠骨微結(jié)構(gòu)、骨IL-6及M-CSF mRNA水平的影響[J]. 薛英,王永炫.  中國現(xiàn)代醫(yī)生. 2017(31)
[2]白細(xì)胞介素-24通過Jak-Stat通路對破骨細(xì)胞影響的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 孟慶陽,孫宏晨,史冊,鄭嶸,李超,孟艾奇,張布,吳立鵬.  口腔醫(yī)學(xué)研究. 2015(08)



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