發(fā)布時(shí)間：2021-11-06 20:58

　　目的前期制備并鑒定了Tat-E7/pORF-mGM-CSF顆粒疫苗,并在小鼠體內(nèi)觀察到良好的抗腫瘤效果,但其體內(nèi)具體分子機(jī)制不清。本研究擬進(jìn)一步利用該疫苗免疫小鼠,分析其體內(nèi)激活T細(xì)胞應(yīng)答的分子機(jī)制。方法通過(guò)免疫組化檢測(cè)該納米顆粒能否將外源基因轉(zhuǎn)入哺乳動(dòng)物細(xì)胞并在動(dòng)物活體內(nèi)正確表達(dá);通過(guò)CCK-8淋巴細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞內(nèi)染色及流式細(xì)胞術(shù)（FCM）、ELISPOT實(shí)驗(yàn)、體外特異性細(xì)胞毒CTL-LDH釋放實(shí)驗(yàn)分析疫苗誘導(dǎo)的短期及記憶性免疫應(yīng)答和其介導(dǎo)的CTL毒性效應(yīng)。結(jié)果當(dāng)r=2.0時(shí)所制備的顆粒為類圓形,大小均勻一致,絕大部分顆粒直徑均分布于20⁸0 nm之間;該納米顆�？蓪GM-CSF基因?qū)氩溉閯?dòng)物細(xì)胞,并可在體外培養(yǎng)細(xì)胞和小鼠體內(nèi)正確表達(dá)。該納米顆粒疫苗在體外和體內(nèi)均很大程度上提高了抗原表位特異性的免疫原性,可誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞增殖、分化,顯著增強(qiáng)抗原特異性CTL應(yīng)答及其產(chǎn)生的細(xì)胞毒效應(yīng)。結(jié)論我們?cè)诒狙芯恐性O(shè)計(jì)并合成的Tat-E7/pGM-CSF納米顆粒疫苗,通過(guò)體外免疫學(xué)研究證實(shí)了其具有良好效果,其機(jī)制可能是該顆粒疫苗的免疫可以維持高水平的特異性CD8

【文章來(lái)源】：免疫學(xué)雜志. 2017,33(05)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：6 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 主要材料
    1.2 主要儀器
    1.3 納米顆粒的組裝
    1.4 激光動(dòng)態(tài)光散射儀測(cè)定自組裝顆粒的粒度分布
    1.5 免疫組化
    1.6 小鼠免疫
    1.7 CCK-8脾細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)
    1.8 ELISPOT法檢測(cè)特異性IFN-γ+T淋巴細(xì)胞
    1.9 細(xì)胞內(nèi)因子染色與流式分析
    1.10 LDH釋放實(shí)驗(yàn)
    1.11 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 激光動(dòng)態(tài)光散射儀測(cè)定納米顆粒疫苗的粒度分布
    2.2 納米顆粒疫苗中的m GM-CSF基本在注射部位淋巴結(jié)及皮膚組織中正確表達(dá)
    2.3 CCK-8法檢測(cè)特異性脾細(xì)胞增殖
    2.4 ELISPOT法檢測(cè)特異性IFN-γ+T淋巴細(xì)胞
    2.5 細(xì)胞內(nèi)因子染色與流式分析檢測(cè)脾細(xì)胞CD3+CD8+IFN-γ+T細(xì)胞頻率
    2.6 LDH釋放實(shí)驗(yàn)檢測(cè)特異性CTL活性
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]HIV-1 Tat49-57/HPV16 E749-57/pGM-CSF納米顆粒疫苗抗腫瘤研究[J]. 唐雋,田志強(qiáng),蘆東徽,楊曉晶,王躍萍,黃瑋.  免疫學(xué)雜志. 2013(10)



本文編號(hào)：3480515