目的前期制備并鑒定了Tat-E7/pORF-mGM-CSF顆粒疫苗,并在小鼠體內(nèi)觀察到良好的抗腫瘤效果,但其體內(nèi)具體分子機制不清。本研究擬進一步利用該疫苗免疫小鼠,分析其體內(nèi)激活T細胞應(yīng)答的分子機制。方法通過免疫組化檢測該納米顆粒能否將外源基因轉(zhuǎn)入哺乳動物細胞并在動物活體內(nèi)正確表達;通過CCK-8淋巴細胞增殖實驗、細胞內(nèi)染色及流式細胞術(shù)（FCM）、ELISPOT實驗、體外特異性細胞毒CTL-LDH釋放實驗分析疫苗誘導(dǎo)的短期及記憶性免疫應(yīng)答和其介導(dǎo)的CTL毒性效應(yīng)。結(jié)果當r=2.0時所制備的顆粒為類圓形,大小均勻一致,絕大部分顆粒直徑均分布于20⁸0 nm之間;該納米顆�？蓪GM-CSF基因?qū)氩溉閯游锛毎?并可在體外培養(yǎng)細胞和小鼠體內(nèi)正確表達。該納米顆粒疫苗在體外和體內(nèi)均很大程度上提高了抗原表位特異性的免疫原性,可誘導(dǎo)T淋巴細胞增殖、分化,顯著增強抗原特異性CTL應(yīng)答及其產(chǎn)生的細胞毒效應(yīng)。結(jié)論我們在本研究中設(shè)計并合成的Tat-E7/pGM-CSF納米顆粒疫苗,通過體外免疫學(xué)研究證實了其具有良好效果,其機制可能是該顆粒疫苗的免疫可以維持高水平的特異性CD8

【文章來源】：免疫學(xué)雜志. 2017,33(05)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 主要材料
    1.2 主要儀器
    1.3 納米顆粒的組裝
    1.4 激光動態(tài)光散射儀測定自組裝顆粒的粒度分布
    1.5 免疫組化
    1.6 小鼠免疫
    1.7 CCK-8脾細胞增殖實驗
    1.8 ELISPOT法檢測特異性IFN-γ+T淋巴細胞
    1.9 細胞內(nèi)因子染色與流式分析
    1.10 LDH釋放實驗
    1.11 統(tǒng)計學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 激光動態(tài)光散射儀測定納米顆粒疫苗的粒度分布
    2.2 納米顆粒疫苗中的m GM-CSF基本在注射部位淋巴結(jié)及皮膚組織中正確表達
    2.3 CCK-8法檢測特異性脾細胞增殖
    2.4 ELISPOT法檢測特異性IFN-γ+T淋巴細胞
    2.5 細胞內(nèi)因子染色與流式分析檢測脾細胞CD3+CD8+IFN-γ+T細胞頻率
    2.6 LDH釋放實驗檢測特異性CTL活性
3 討論


【參考文獻】：
期刊論文
[1]HIV-1 Tat49-57/HPV16 E749-57/pGM-CSF納米顆粒疫苗抗腫瘤研究[J]. 唐雋,田志強,蘆東徽,楊曉晶,王躍萍,黃瑋.  免疫學(xué)雜志. 2013(10)



本文編號：3480515