目的:獲得半抗原雌三醇（μE₃）高特異性和高親和力的單克隆抗體。方法:本研究利用煙草花葉病毒（TMV）作為抗原的載體,通過化學(xué)方法與半抗原雌三醇（μE₃）連接形成TMV-EPMK-μE₃復(fù)合體,利用該復(fù)合體免疫小鼠,再通過雜交瘤篩選技術(shù)來獲得具有高親和力的μE₃單克隆抗體。結(jié)果:TMV-EPMK-μE₃免疫的小鼠血清效價達(dá)到1∶100 000,通過細(xì)胞融合及篩選獲得4株分泌抗體效價較高的雜交瘤細(xì)胞,然后進(jìn)行了亞克隆,分別命名為TE1-1、TE2-1、TE3-1和TE 4-1�？贵w的效價均在10^-8左右,最低檢測限約為1 ng。SDS-PAGE電泳結(jié)果顯示4株抗體分別在25 kD和50 kD處各有一條清晰的條帶,純度都在95%以上。獲得的4株抗體通過羅氏亞型鑒定試劑盒測定輕鏈類型均為κ;TE2-1和TE4-1單抗重鏈為IgG2a、 TE1-1和TE3-1單抗重鏈為IgG2b。TE1-1和TE3-1為TMV-EPMK-μE₃的特異性抗體。... 

【文章來源】：中國免疫學(xué)雜志. 2019,35(20)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：4 頁

【部分圖文】：

TMV-EPMK-μE3第三次免疫小鼠后的效價Fig．1TiterafterthirdTMV-EPMK-μE3immunization

CPMV-μE3發(fā)生反應(yīng)，而與TMV-EPMK-μE3和TMV-EPMK產(chǎn)生較強(qiáng)的抗原抗體反應(yīng)，說明TE2-1和TE4-1是針對TMV-EPMK的抗體;TE1-1和TE3-1不與TMV-EPMK發(fā)生反應(yīng)，而與TMV-EPMK-μE3和CPMV-μE3發(fā)生較強(qiáng)的抗原抗體反應(yīng)，說明TE1-1和TE3-1不與載體產(chǎn)生交叉反應(yīng)，是μE3的特異性抗體。圖2TE1-1、TE2-1、TE3-1和TE4-1SDS-PAGE電泳圖Fig．2SDS-PAGEofTE1-1，TE2-1，TE3-1andTE4-1Note:1.Marker;2.TE1-1;3.TE2-1;4.TE3-1;5.TE4-1.圖3TMV-EPMK-μE34株單克隆抗體效價測定Fig．3TitrationELISAforanti-TMV-EPMK-μE3mAbs·1152·李旭等以煙草花葉病毒為載體的μE3單克隆抗體的制備及鑒定第20期

表2單克隆抗體的亞型鑒定Tab．2SubtypesidentificationofmonoclonalantibodiesNo.ThetypeoflightchainThetypeofheavychainTE1-1κIgG2bTE2-1κIgG2aTE3-1κIgG2bTE4-1κIgG2a圖4TMV-EPMK-μE3免疫小鼠獲得單克隆抗體的特異性分析Fig．4SpecificityanalysisofmAbsagainstTMV-EPMK-μE33討論TMV有一個簡單的由單個外殼蛋白纏繞的6.4kB(+)-單鏈ＲNA功能結(jié)構(gòu)，其為ＲNA病毒，并且能夠?qū)ζ溥M(jìn)行簡單的基因操控。TMV能夠使植物感染，但最近研究表明，通過基因改造或化學(xué)修飾后其可以應(yīng)用于疫苗的研發(fā)中。在疫苗的研發(fā)中，抗原可以通過TMV作為載體遞呈給抗原遞呈細(xì)胞，進(jìn)而刺激機(jī)體完成較強(qiáng)免疫應(yīng)答［11］。μE3作為半抗原，不具備免疫原性，無法單獨刺激機(jī)體并引起有效的免疫應(yīng)答，把半抗原與通過化學(xué)方法或基因改造的分子載體(Proteincarrier)結(jié)合，使半抗原成為該蛋白質(zhì)的一個或多個抗原決定簇，該半抗原就會獲得免疫原性，并且能刺激機(jī)體產(chǎn)生相應(yīng)的抗體［12-15］。在本實驗中TMV作為半抗原μE3的載體，利用通過化學(xué)連接形成的TMV-EPMK-μE3復(fù)合體來免疫小鼠，再通過高效高通量單抗雜交瘤篩選技術(shù)獲得了針對μE3的2株單克隆抗體，對抗體純度、特性及抗原抗體反應(yīng)性均作了分析，實驗獲得的高親和力的針對μE3的單克隆抗體可以檢測母體血液和尿液中的μE3濃度，從而判斷胎兒的健康和發(fā)育狀況，對能夠引起胎兒畸形的愛德華氏綜合征或唐氏綜合征進(jìn)行產(chǎn)前篩查［16］。通過本實驗研究，半抗原μE3利用TMV作為載體，使其免疫原性獲得了有效提高，能夠刺激機(jī)體產(chǎn)生高效的免疫應(yīng)答反應(yīng)，對動?


本文編號：3454068