糖化血紅蛋白（HemoglobinAic,HbAic）作為一種典型的糖基化蛋白,其含量作為糖尿病的早期診斷和監(jiān)控指標,具有重要的臨床應用價值。另外,HbA1c的含量與糖尿病并發(fā)癥的發(fā)生發(fā)展有著密切聯系。糖基化會導致血紅蛋白（Hemoglobin,Hb）結構的改變,從而引起一系列生化效應,最終影響Hb的正常輸氧功能。因此本論文以正常成人、糖尿病人和體外糖化的Hb、HbA1c與HbA0為研究對象,結合色譜學、光譜學和質譜學等方法,分析糖基化導致的結構性質變化,為了揭示糖基化造成的功能性障礙和相關藥物設計提供信息。首先,通過正交實驗得到了影響體外糖基化Hb降解的主次因素。然后利用離子交換層析柱和硼酸親和層析柱對正常成人、糖尿病人和體外糖化的Hb進行HbA1c和HbA0的分離提純。分離提純過程的吸收光譜、高效液相色譜表明,分離提純的蛋白為二聚體結構,并且糖基化程度越高的Hb,造成Hb被糖基化的位點數量就越多。HbA1c:和HbA0蛋白的質譜表明,HbA1c的β亞基相對于HbA0的相對分子質量大162 Da,表明HbA1c的β亞基帶有一個糖基。最后,對Hb、HbA1c和HbA0進行非變性凝膠電泳... 

【文章來源】：南京理工大學江蘇省 211工程院校

【文章頁數】：75 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１．２非酶促糖化血紅蛋白形成過程??Ｆｉｇｕｒｅ?１．２?Ｎｏｎ?－?ｅｎｚｙｍａｔｉｃ?ｆｏｒｍａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｅｄ?ｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎ??

（Ａ）?ｉｓ?ｅｘｐａｎｄｅｄ?ｆｕｒｔｈｅｒ?ｔｏ?ｈｉｇｈｌｉｇｈｔ?ｔｈｅ?ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ，?ａｎｄ?Ｂ，?ｓｐｅｃｔｒａ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｅｌｕｔｉｏｎ?ｆｒａｃｔｉｏｎ?ｂｙ?ＨＰＬＣ，?ｔｈｅ??ｇｒａｐｈ?ｉｎｓｅｔ?ｉｎ?（Ｂ）?ｉｓ?ｔｈｅ?ｌｅｖｅｌ?ｏｆ?ＨｂＡｉｃ?ｔｏ?ｈｉｇｈｌｉｇｈｔ?ｔｈｅ?ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ?ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ．??由圖２．３可以看出，糖尿病人Ｈｂ經離子交換柱表現與正常成人Ｈｂ相似，主要區(qū)別??于２５％?Ｂ洗脫峰吸收較高，符合于樣品為糖尿病人Ｈｂ，含有較高含量的ＨｂＡｌｃ。在實??際實驗中

以此得到大量的ＨｂＡｉｃ。??用于體外糖基化的樣品有經初步分離的正常成人Ｈｂ，還有經離子交換層析精分離??的ＨｂＡ。。其分離純化結果對應如下圖２．４－２．５圖：??２０??４１５ｎｍ??＊＊?＼??４０５?ｎｍ??Ａ．?２８０?ｎｍ??１６?■?Ａｂｓ??ｒｘ２５??８?＇?０?２００?４００?６００??Ｔｉｍｅ?（ｍｉｎ）?Ｉ??４．?Ｖ＼??０?２００?４００?６００?８００??Ｔｉｍｅ?（ｍｉｎ）??１２５?１?Ｒ?ｉ〇〇?＾?ＨｂＡ１ｃ?ｐｂＡ０?—?３４??０ｓ＊?Ａ１－１Ｉ—?ａ?５－６??１００?■?￡ｃｎ?７－１１??＜５０?■?１２??＂〇?Ｉ??１３??３?７５?．?＾?????ｍｓ??＜?０?１０?２０??１６??Ｅ?．?Ｆｒａｃｔｉｏｎ?ｎｕｍｂｅｒ?ｌ＼?１７－１８??２５．?ｋ?＼?二??０?１?２?３?４?５?６??Ｔｉｍｅ?（ｍｉｎ）??圖２．４體外糖基化Ｈｂ的離子交換層析柱分離的效果圖??（Ａ，紫外可見光吸收光譜圖；Ｂ，?Ｔｈｅｒｍｏ高效液相色譜圖）??Ｆｉｇｕｒｅ?２．４?Ｃａｔｉｏｎ?ｅｘｃｈａｎｇｅ?ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ?ｗｉｔｈ?ＵＶ－ＶＩＳ?ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ｇｌｙｃａｔｅｄ?ｎｏｎｎａｌ?Ｈｂ?ｉｎ?ｖｉｔｒｏ．?Ａ，??ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ?ｐｒｏｆｉｌｅ?ｂｙ?ＵＶ－ＶＩＳ?（ａｔ?４１５?ｎｍ

【參考文獻】：
期刊論文
[1]糖化血紅蛋白標準化及其檢測技術的發(fā)展[J]. 周文娟,吳云翔,易軍.  生物化學與生物物理進展. 2015(05)
[2]同步輻射中的蛋白質結構和功能研究[J]. 董宇輝.  現代物理知識. 2014(05)
[3]預測蛋白質可結晶性研究進展[J]. 周仁斌,盧慧甍,尹大川.  生物工程學報. 2014(09)
[4]晚期糖化終末產物受體基因多態(tài)性與糖尿病動脈硬化關系的研究進展[J]. 葉靜思,李希圣,林夏鴻.  醫(yī)學綜述. 2013(22)
[5]光譜法研究尿素對水溶液中血紅蛋白構象的影響[J]. 馬林,魏志強,黃愛民,楊華,何維仁,林瑞森.  物理化學學報. 2009(09)
[6]血紅蛋白A1C的基本特性研究[J]. 楊錦云,王保寧,孟延發(fā).  四川大學學報(自然科學版). 2008(04)
[7]分子生物學在蛋白質結晶中的應用[J]. 袁彩,劉釤,黃明東.  生物化學與生物物理進展. 2005(02)
[8]同步輻射在生物大分子結構研究中的應用[J]. 楊瑞瑛,劉鵬.  現代儀器. 2004(06)
[9]蛋白質晶體中的分子堆砌與晶體生長[J]. 陳世芝.  生物化學與生物物理進展. 1990(06)

博士論文
[1]幾種不同基質硼酸親和整體柱的制備及其在糖蛋白分離富集中的應用[D]. 楊帆.南開大學 2013



本文編號：3447415