糖化血紅蛋白（HemoglobinAic,HbAic）作為一種典型的糖基化蛋白,其含量作為糖尿病的早期診斷和監(jiān)控指標(biāo),具有重要的臨床應(yīng)用價值。另外,HbA1c的含量與糖尿病并發(fā)癥的發(fā)生發(fā)展有著密切聯(lián)系。糖基化會導(dǎo)致血紅蛋白（Hemoglobin,Hb）結(jié)構(gòu)的改變,從而引起一系列生化效應(yīng),最終影響Hb的正常輸氧功能。因此本論文以正常成人、糖尿病人和體外糖化的Hb、HbA1c與HbA0為研究對象,結(jié)合色譜學(xué)、光譜學(xué)和質(zhì)譜學(xué)等方法,分析糖基化導(dǎo)致的結(jié)構(gòu)性質(zhì)變化,為了揭示糖基化造成的功能性障礙和相關(guān)藥物設(shè)計提供信息。首先,通過正交實驗得到了影響體外糖基化Hb降解的主次因素。然后利用離子交換層析柱和硼酸親和層析柱對正常成人、糖尿病人和體外糖化的Hb進行HbA1c和HbA0的分離提純。分離提純過程的吸收光譜、高效液相色譜表明,分離提純的蛋白為二聚體結(jié)構(gòu),并且糖基化程度越高的Hb,造成Hb被糖基化的位點數(shù)量就越多。HbA1c:和HbA0蛋白的質(zhì)譜表明,HbA1c的β亞基相對于HbA0的相對分子質(zhì)量大162 Da,表明HbA1c的β亞基帶有一個糖基。最后,對Hb、HbA1c和HbA0進行非變性凝膠電泳... 

【文章來源】：南京理工大學(xué)江蘇省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１．２非酶促糖化血紅蛋白形成過程??Ｆｉｇｕｒｅ?１．２?Ｎｏｎ?－?ｅｎｚｙｍａｔｉｃ?ｆｏｒｍａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｅｄ?ｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎ??

（Ａ）?ｉｓ?ｅｘｐａｎｄｅｄ?ｆｕｒｔｈｅｒ?ｔｏ?ｈｉｇｈｌｉｇｈｔ?ｔｈｅ?ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ，?ａｎｄ?Ｂ，?ｓｐｅｃｔｒａ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｅｌｕｔｉｏｎ?ｆｒａｃｔｉｏｎ?ｂｙ?ＨＰＬＣ，?ｔｈｅ??ｇｒａｐｈ?ｉｎｓｅｔ?ｉｎ?（Ｂ）?ｉｓ?ｔｈｅ?ｌｅｖｅｌ?ｏｆ?ＨｂＡｉｃ?ｔｏ?ｈｉｇｈｌｉｇｈｔ?ｔｈｅ?ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ?ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ．??由圖２．３可以看出，糖尿病人Ｈｂ經(jīng)離子交換柱表現(xiàn)與正常成人Ｈｂ相似，主要區(qū)別??于２５％?Ｂ洗脫峰吸收較高，符合于樣品為糖尿病人Ｈｂ，含有較高含量的ＨｂＡｌｃ。在實??際實驗中

以此得到大量的ＨｂＡｉｃ。??用于體外糖基化的樣品有經(jīng)初步分離的正常成人Ｈｂ，還有經(jīng)離子交換層析精分離??的ＨｂＡ。。其分離純化結(jié)果對應(yīng)如下圖２．４－２．５圖：??２０??４１５ｎｍ??＊＊?＼??４０５?ｎｍ??Ａ．?２８０?ｎｍ??１６?■?Ａｂｓ??ｒｘ２５??８?＇?０?２００?４００?６００??Ｔｉｍｅ?（ｍｉｎ）?Ｉ??４．?Ｖ＼??０?２００?４００?６００?８００??Ｔｉｍｅ?（ｍｉｎ）??１２５?１?Ｒ?ｉ〇〇?＾?ＨｂＡ１ｃ?ｐｂＡ０?—?３４??０ｓ＊?Ａ１－１Ｉ—?ａ?５－６??１００?■?￡ｃｎ?７－１１??＜５０?■?１２??＂〇?Ｉ??１３??３?７５?．?＾?????ｍｓ??＜?０?１０?２０??１６??Ｅ?．?Ｆｒａｃｔｉｏｎ?ｎｕｍｂｅｒ?ｌ＼?１７－１８??２５．?ｋ?＼?二??０?１?２?３?４?５?６??Ｔｉｍｅ?（ｍｉｎ）??圖２．４體外糖基化Ｈｂ的離子交換層析柱分離的效果圖??（Ａ，紫外可見光吸收光譜圖；Ｂ，?Ｔｈｅｒｍｏ高效液相色譜圖）??Ｆｉｇｕｒｅ?２．４?Ｃａｔｉｏｎ?ｅｘｃｈａｎｇｅ?ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ?ｗｉｔｈ?ＵＶ－ＶＩＳ?ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ｇｌｙｃａｔｅｄ?ｎｏｎｎａｌ?Ｈｂ?ｉｎ?ｖｉｔｒｏ．?Ａ，??ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ?ｐｒｏｆｉｌｅ?ｂｙ?ＵＶ－ＶＩＳ?（ａｔ?４１５?ｎｍ

【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
[1]幾種不同基質(zhì)硼酸親和整體柱的制備及其在糖蛋白分離富集中的應(yīng)用[D]. 楊帆.南開大學(xué) 2013



本文編號：3447415