采用nano LC-LTQ-Orbitrap-MS/MS蛋白質(zhì)組學(xué)方法篩選鑒定香附四物湯干預(yù)原發(fā)性痛經(jīng)模型小鼠卵巢組織中的差異表達(dá)蛋白,推測(cè)香附四物湯治療原發(fā)性痛經(jīng)的機(jī)制。采用雌激素和縮宮素聯(lián)合造成原發(fā)性痛經(jīng)模型,給藥組連續(xù)灌胃給予香附四物湯3 d,于末次給藥后1 h,取卵巢,經(jīng)蛋白提取、變性、還原、烷基化、脫鹽、酶解后,進(jìn)行nano LC分離并在線連接電噴霧串聯(lián)Orbitrap質(zhì)譜分析,利用Thermo Proteome discoverer 1.4進(jìn)行數(shù)據(jù)處理,篩選并鑒定差異表達(dá)蛋白,對(duì)差異表達(dá)蛋白進(jìn)行生物信息學(xué)分析。隨后采用Western blot法,將重要差異蛋白進(jìn)行驗(yàn)證。正常組、模型組、給藥組3組共有的差異蛋白106個(gè),參與細(xì)胞過程的蛋白所占比例較大,其所參與的黏著連接、黏著斑等信號(hào)通路對(duì)細(xì)胞內(nèi)各種信號(hào)通路均有調(diào)節(jié)作用。驗(yàn)證的ADRM1蛋白在模型組中,較正常組表達(dá)上調(diào);給藥后,較模型組表達(dá)下調(diào)。通過有效的比較分析,得到一些香附四物湯干預(yù)原發(fā)性痛經(jīng)的差異表達(dá)蛋白,其中ADRM1蛋白有可能是香附四物湯作用的靶點(diǎn)。 

【文章來源】：中國中藥雜志. 2016,41(16)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

正常組(A)、模型組(B)、給藥組(C)小鼠卵巢蛋白總離子流圖

生物調(diào)節(jié)(biologi-calregulation)、細(xì)胞成分組織(cellularcomponentor-ganization)、細(xì)胞成分組織或生源(cellularcompo-nentorganizationorbiogenesis)、細(xì)胞發(fā)展進(jìn)程(cellu-lardevelopmentalprocess)、單個(gè)有機(jī)體細(xì)胞進(jìn)程(single-organismcellularprocess)、細(xì)胞過程調(diào)節(jié)(regulationofcellularprocess)、細(xì)胞器組織(organ-elleorganization)、細(xì)胞變異(celldifferentiation)、神經(jīng)變異調(diào)節(jié)(regulationofneurondifferentiation)、蛋白質(zhì)復(fù)合體亞基組織(proteincomplexsubunitorgan-ization)等17個(gè)生物學(xué)過程，見表1，圖2。表13組共有的部分差異表達(dá)蛋白Table1Comparisonofdifferentiallyexpressedproteinsinovaryduringnormal，modelandXiangfuSiwudecoctiongroup(part)蛋白編號(hào)描述ratioStdDevP趨勢(shì)ABABABABA2A4A6phosphoinositidephospholipaseC1.650.340.670.483.0×10－29.2×10－3上調(diào)下調(diào)Q8BMC3SHC-transformingprotein21.750.451.311.305.6×10－33.1×10－2上調(diào)下調(diào)Q8CDI9hormone-sensitivelipase1.840.610.550.592.6×10－21.5×10－4上調(diào)下調(diào)Q8CIH51-phosphatidylinositol4，5-bisphos-phatephosphodiesterasegamma-20.182.390.370.581.0×10－21.4×10－2下調(diào)上調(diào)Q8VHX6filamin-C1.590.440.480.646.1×10－37.5×10－3上調(diào)下調(diào)Q9JKV1proteasomalubiquitinreceptorAD-ＲM12.440.460.990.612.5×10－42.6×10－2上調(diào)下調(diào)Q9QY76vesicle-associatedmembranepro-tein-associatedproteinB0.511.560.690.814.9×10－33.3×10－2下調(diào)上調(diào)注:A.模型組與正常組相比;B.香附四物湯給藥組與模型組相比。圖2差異蛋白涉及的生物學(xué)過程Fig.2Thebiologicalprocessesinvolv

gnalingpathway)、白細(xì)胞跨內(nèi)皮遷移(leukocytetransendothelialmigration)、神經(jīng)退行性失調(diào)(neurodegenerativeDisorders)、磷脂酰肌醇信號(hào)系統(tǒng)(phosphatidylinositolsignalingsystem)、嘧啶代謝(pyrimidinemetabolism)、緊密連接(tightjunc-tion)、三羧酸循環(huán)(citratecycle)等信號(hào)通路。采用Westernblot法，對(duì)卵巢樣本(正常對(duì)照組、模型組和給藥組各6個(gè))中的蛋白ADＲM1(ad-hesion-regulatingmolecule1)進(jìn)行了驗(yàn)證，見圖3，表2。以灰度值的平均值計(jì)，正常對(duì)照組表達(dá)量為1，模型組表達(dá)量為1.81，給藥組表達(dá)量為1.20。圖3Westernblot法驗(yàn)證ADＲM1蛋白Fig.3VerificationofADＲM1byWesternblot·3063·

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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