目的探討c-Jun氨基末端激酶（JNK）在單增李斯特菌（LM）感染小鼠腹腔巨噬細(xì)胞過程中,對于炎癥復(fù)合體活化與裝配的作用,及其與毒力因子李斯特菌溶血素（LLO）的關(guān)系。方法將小鼠腹腔巨噬細(xì)胞隨機(jī)分為SP處理組、未處理組及陰性對照組（NI）,每組3個復(fù)孔。SP處理組用JNK抑制劑SP600125預(yù)處理小鼠腹腔巨噬細(xì)胞1h,除NI外,其余各組巨噬細(xì)胞感染野生型LM（WT-LM）24h,酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）檢測上清液中白細(xì)胞介素（IL）-18的表達(dá);免疫熒光觀察細(xì)胞內(nèi)炎癥復(fù)合體的關(guān)鍵蛋白組分ASC斑點(diǎn)（ASC-speck）的形成情況;Western blot檢測WT-LM感染小鼠腹腔巨噬細(xì)胞不同時相點(diǎn)JNK的磷酸化水平。同時使用LM的△hly和△hly::hly突變株感染小鼠腹腔巨噬細(xì)胞,觀察胞內(nèi)ASC-speck的形成情況及不同時相點(diǎn)JNK蛋白的磷酸化水平。結(jié)果 SP處理組IL-18的表達(dá)水平與未處理組相比明顯降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）,免疫熒光法發(fā)現(xiàn)SP處理組ASC-speck陽性的細(xì)胞百分比明顯低于未處理組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。Weste... 

【文章來源】：國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志. 2019,40(20)

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

圖１ＪＮＫ抑制劑對ＬＭ感染過程中ＩＬ－１８表達(dá)水平的影響

２．３野生型ＬＭ感染巨噬細(xì)胞不同時相時ＪＮＫ的磷酸化表達(dá)水平從圖中可以看出，野生型ＬＭ感染小鼠腹腔巨噬細(xì)胞后，ｔ－ＪＮＫ的蛋白表達(dá)水平無明顯差別，然而，ｐ－ＪＮＫ水平在感染后１０ｍｉｎ即有明顯表達(dá)，隨感染時間的延長，ｐ－ＪＮＫ的表達(dá)量逐漸增多，在２０ｍｉｎ和４０ｍｉｎ時達(dá)到最高峰，之后開始緩慢減少，但持續(xù)１２０ｍｉｎ時仍有明顯表達(dá)。見圖３。２．４ＬＭ突變株感染小鼠腹腔巨噬細(xì)胞后胞漿內(nèi)形成ＡＳＣ－ｓｐｅｃｋ的變化結(jié)果顯示，△ｈｌｙ－ＬＭ感染組ＡＳＣ－ｓｐｅｃｋ陽性細(xì)胞的百分比（２．０９±０．３３）％與野生型ＬＭ感染組百分比（４５．８１±６．０３）％相比顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ｔ＝１１．２６，Ｐ＜０．０１），而在ＬＬＯ重新表達(dá)的△ｈｌｙ：：ｈｌｙ－ＬＭ感染組中，ＡＳＣ－ｓｐｅｃｋ陽性細(xì)胞的百分比（４２．１８±２．５０）％得到明顯的恢復(fù)，與野生型ＬＭ組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ｔ＝１．０９７，Ｐ＞０．０５）。見圖４。圖３野生型ＬＭ感染巨噬細(xì)胞后不同時相ｔ－ＪＮＫ和ｐ－ＪＮＫ的表達(dá)水平圖４ＬＭ突變菌株感染巨噬細(xì)胞后胞漿內(nèi)ＡＳＣ－ｓｐｅｃｋ的形成個數(shù)比較圖５野生型和突變型ＬＭ感染小鼠腹腔巨噬細(xì)胞后ＪＮＫ蛋白表達(dá)水平隨時間的變化情況２．５ＬＬＯ對ＬＭ感染后ＪＮＫ蛋白磷酸化水平的影響從圖５中可以看出，無論野生型ＬＭ，還是突變菌株ＬＭ感染細(xì)胞后，ｐ－ＪＮＫ蛋白水平在感染４０ｍｉｎ時均有高表達(dá)，隨感染時間的延長，野生型ＬＭ和△ｈｌｙ：：ｈｌｙ－ＬＭ感

Ｃ－ｓｐｅｃｋ的變化結(jié)果顯示，△ｈｌｙ－ＬＭ感染組ＡＳＣ－ｓｐｅｃｋ陽性細(xì)胞的百分比（２．０９±０．３３）％與野生型ＬＭ感染組百分比（４５．８１±６．０３）％相比顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ｔ＝１１．２６，Ｐ＜０．０１），而在ＬＬＯ重新表達(dá)的△ｈｌｙ：：ｈｌｙ－ＬＭ感染組中，ＡＳＣ－ｓｐｅｃｋ陽性細(xì)胞的百分比（４２．１８±２．５０）％得到明顯的恢復(fù)，與野生型ＬＭ組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ｔ＝１．０９７，Ｐ＞０．０５）。見圖４。圖３野生型ＬＭ感染巨噬細(xì)胞后不同時相ｔ－ＪＮＫ和ｐ－ＪＮＫ的表達(dá)水平圖４ＬＭ突變菌株感染巨噬細(xì)胞后胞漿內(nèi)ＡＳＣ－ｓｐｅｃｋ的形成個數(shù)比較圖５野生型和突變型ＬＭ感染小鼠腹腔巨噬細(xì)胞后ＪＮＫ蛋白表達(dá)水平隨時間的變化情況２．５ＬＬＯ對ＬＭ感染后ＪＮＫ蛋白磷酸化水平的影響從圖５中可以看出，無論野生型ＬＭ，還是突變菌株ＬＭ感染細(xì)胞后，ｐ－ＪＮＫ蛋白水平在感染４０ｍｉｎ時均有高表達(dá)，隨感染時間的延長，野生型ＬＭ和△ｈｌｙ：：ｈｌｙ－ＬＭ感染組ｐ－ＪＮＫ的表達(dá)量略有下降，但仍有明顯表達(dá)，但△ｈｌｙ－ＬＭ感染組ｐ－ＪＮＫ表達(dá)量在８０ｍｉｎ時發(fā)生驟然消失，在感染１２０ｍｉｎ時仍未恢復(fù)。３討論單核細(xì)胞增生李斯特菌是具有高致死率的食源性病原微生物之一，研究表明在ＬＭ感染過程中，ＬＬＯ對于ＬＭ發(fā)揮毒力作用至關(guān)重要，它是李斯特菌入侵宿主細(xì)胞的強(qiáng)力分子武器，也是引起李斯特菌病的首要步驟［９］。ＬＭ在ＬＬＯ的幫助下進(jìn)入胞漿后，宿主細(xì)胞

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Syk調(diào)控單增李斯特菌感染中炎癥復(fù)合體的活化[J]. 劉倩倩,劉運(yùn)德,張瓊,李雪,馮香梅,劉曉春,邸寶華,申艷娜.  天津醫(yī)藥. 2014(05)



本文編號：3429299