背景:雙孔鉀通道TWIK-1是腦成熟星形膠質(zhì)細(xì)胞（星膠）表達(dá)量最高的鉀通道,但主要位于胞質(zhì),功能不明。課題組前期實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),海馬星膠G_i/G_o偶聯(lián)的代謝型谷氨酸受體3（mGluR3）激活促進(jìn)TWIK-1轉(zhuǎn)運(yùn)到胞膜,并增強(qiáng)星膠對細(xì)胞外NH₄⁺的攝取。mGluR3為成年小鼠海馬星膠唯一高表達(dá)的mGluR類型,基于NH₄⁺是谷氨酸-谷氨酰胺循環(huán)（glutamate-glutamine cycle,GGC）的反應(yīng)底物,而該循環(huán)是維持谷氨酸遞質(zhì)穩(wěn)態(tài)的重要機(jī)制,我們推測星膠TWIK-1活動依賴性膜表達(dá)可能調(diào)控GGC,以精確匹配神經(jīng)元遞質(zhì)合成的需求。目的:探究星膠TWIK-1通道活動依賴性運(yùn)輸上膜對海馬神經(jīng)元功能活動的影響,以及GGC是否參與此過程。方法:利用野生型和TWIK-1基因敲除（TWIK-1 KO）C57BL/6J小鼠,選擇海馬Schaffer側(cè)枝-CA1區(qū)這一研究突觸可塑性和學(xué)習(xí)記憶的經(jīng)典神經(jīng)通路,運(yùn)用了腦片電生理、急性單細(xì)胞分離、免疫熒光染色、蛋白印跡等多種... 

【文章來源】：華中科技大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學(xué)位級別】：碩士

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摘要
Abstract
1 前言
2 實(shí)驗(yàn)材料
    2.1 實(shí)驗(yàn)動物
    2.2 實(shí)驗(yàn)主要儀器
    2.3 實(shí)驗(yàn)耗材
    2.4 實(shí)驗(yàn)試劑
    2.5 實(shí)驗(yàn)常用溶液的配制
    2.6 主要藥物的配制使用和儲存
3 實(shí)驗(yàn)方法
    3.1 急性分離單個星形膠質(zhì)細(xì)胞及 SR101 染色
    3.2 星形膠質(zhì)細(xì)胞免疫熒光染色
    3.3 小鼠海馬腦片的制備
    3.4 記錄電極（玻璃微電極）的清洗和拉制
    3.5 全細(xì)胞膜片鉗電極內(nèi)液的配制
    3.6 膜片鉗場電位的記錄
    3.7 野生型和 TWIK-1 KO 小鼠腦片海馬 CA1 區(qū)錐體神經(jīng)元的 PPFratio 記錄
    3.8 小鼠腦片海馬 CA1 區(qū)錐體神經(jīng)元 Biocytin
    3.9 Wild-type 和 TWIK-1 KO 小鼠腦組織海馬總蛋白質(zhì)提取
    3.10 BCA 法測定樣品蛋白的濃度
    3.11 Western blot
    3.12 數(shù)據(jù)處理和分析
4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    4.1 激活星膠mGluR3促進(jìn)海馬Schaffer-CA1通路長時(shí)程增強(qiáng)(LTP)
    4.2 TWIK-1基因敲除海馬Schaffer-CA1通路LTP幅度減弱
    4.3 TWIK-1基因敲除不影響海馬分子水平突觸結(jié)構(gòu)
    4.4 TWIK-1蛋白缺乏不影響錐體神經(jīng)元樹突形態(tài)
    4.5 激活星膠mGluR3誘發(fā)LTP與谷氨酸-谷氨酰胺循環(huán)的相關(guān)性
5 討論
6 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
(綜述)星形膠質(zhì)細(xì)胞主導(dǎo)的谷氨酸-谷氨酰胺循環(huán)研究進(jìn)展
    參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]中樞神經(jīng)系統(tǒng)谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體的研究進(jìn)展[J]. 程肖蕊,周文霞,張永祥.  生命科學(xué). 2009(02)



本文編號：3429306