本文關(guān)鍵詞：宿主抵御病原菌入侵的新機制：病原菌效應(yīng)蛋白的谷胱甘肽化修飾，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：蛋白質(zhì)的谷胱甘肽化修飾(S-glutathionylation)屬于蛋白質(zhì)翻譯后修飾的一種,是指在蛋白質(zhì)的半胱氨酸殘基上引入一個谷胱甘肽(GSH, γ-Glu-Cys-Gly)的小分子基團,存在于許多細胞內(nèi),具有抗氧化、解毒、調(diào)節(jié)細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和細胞增殖等重要作用。最近研究表明,其在防御病原菌入侵宿主方面也發(fā)揮著一個重要的功能,而這種作用機制目前仍是未知的。基于此,我們對其展開了研究,并猜測可能存在的兩種機制：一種是病原菌自身蛋白質(zhì)發(fā)生谷胱甘肽化修飾,從而減弱了它入侵宿主的能力；另一種可能是宿主自身的蛋白質(zhì)發(fā)生了谷胱甘肽化修飾,從而積極地抵御病原菌的入侵。在前期開展的研究中,我們發(fā)現(xiàn)志賀氏菌的效應(yīng)蛋白在體外能發(fā)生谷胱甘肽化修飾,因此將研究重點放在病原體自身蛋白質(zhì)發(fā)生谷胱甘肽化修飾。具體開展了以下研究：利用谷胱甘肽化修飾的體外重組體系及質(zhì)譜實驗驗證OspF是否能在體外發(fā)生這種修飾；隨后進一步探討谷胱甘肽化修飾后的OspF,對其酶活以及與底物結(jié)合力的影響；隨后深入到病原病感染哺乳動物細胞,研究OspF發(fā)生谷胱甘肽化修飾的情況。最后還對其它的病原菌效應(yīng)蛋白SpvC、OspB、OspC、IpaH、YopJ等的谷胱甘肽化修飾也進行了初步探討。研究結(jié)果表明：1)OspF蛋白都能夠在體外發(fā)生谷胱甘肽化修飾反應(yīng),且這種修飾受氧化還原壓力調(diào)節(jié)；2)發(fā)生谷胱甘肽化修飾的OspF蛋白自身的酶活和與底物結(jié)合的能力均下降；3)志賀氏菌感染真核細胞后體內(nèi)表達的OspF確實能發(fā)生谷胱甘肽化修飾,使MAPK信號通路中的P-Erk量呈現(xiàn)先減少后逐漸恢復(fù)的趨勢；4)體內(nèi)外的這種修飾受環(huán)境氧化還原壓力的影響；5)這種修飾在病原菌的許多效應(yīng)蛋白中普遍存在。
【關(guān)鍵詞】：病原菌 效應(yīng)蛋白 OspF 谷胱甘肽化修飾 酶活
【學(xué)位授予單位】：西南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R378
【目錄】：

• 摘要7-9
• ABSTRACT9-11
• 第一章 文獻綜述11-19
• 1.1 蛋白質(zhì)的翻譯后修飾11-12
• 1.2 病原菌的三型分泌系統(tǒng)及效應(yīng)蛋白12-14
• 1.2.1 病原菌的三型分泌系統(tǒng)12-13
• 1.2.2 三型分泌系統(tǒng)的效應(yīng)蛋白以及病原菌入侵宿主細胞的相關(guān)機制13-14
• 1.3 磷酸化蘇氨酸裂合酶家族14-15
• 1.3.1 磷酸化蘇氨酸裂合酶由來14
• 1.3.2 磷酸蘇氨酸裂合酶的作用機理14-15
• 1.4 蛋白質(zhì)的谷胱甘肽化修飾15-16
• 1.4.1 蛋白質(zhì)的翻譯后修飾的研究進展15
• 1.4.2 蛋白質(zhì)的谷胱甘肽化修飾簡介15-16
• 1.4.3 蛋白質(zhì)的谷胱甘肽化修飾的生理作用和研究進展16
• 1.5 病原菌感染過程中蛋白質(zhì)的谷胱甘肽化修飾16-19
• 第二章 引言19-22
• 2.1 研究背景和意義19-20
• 2.2 研究問題的由來20-22
• 第三章 材料與方法22-35
• 3.1 實驗材料22-26
• 3.1.1 基礎(chǔ)實驗材料22-23
• 3.1.2 細胞23
• 3.1.3 真核和原核質(zhì)粒23
• 3.1.4 試劑盒23
• 3.1.5 試劑和耗材23
• 3.1.6 試劑配方23-26
• 3.2 常用儀器設(shè)備26
• 3.3 實驗方法26-35
• 3.3.1 真核載體和原核載體的構(gòu)建26-27
• 3.3.2 相關(guān)蛋白的表達及純化27-29
• 3.3.3 BCA蛋白濃度的定量方法29
• 3.3.4 細胞培養(yǎng)29-32
• 3.3.5 體外Pull down實驗32-33
• 3.3.6 蛋白免疫共沉淀(IP)33-35
• 第四章 結(jié)果與分析35-53
• 4.1 OSPF蛋白體外谷胱甘肽化修飾反應(yīng)35-39
• 4.2 點突變及質(zhì)譜結(jié)果顯示SPVC及OSPF蛋白的谷胱甘肽化修飾位點39-40
• 4.3 OSPF蛋白的磷酸蘇氨酸裂合酶活性受谷胱甘肽化修飾的影響40-43
• 4.4 OSPF蛋白谷胱甘肽化修飾對底物的結(jié)合力的影響43-44
• 4.5 OSPF蛋白在體內(nèi)的谷胱甘肽化修飾44-46
• 4.6 志賀氏菌感染真核細胞時對細胞整體水平及OSPF的谷胱甘肽化修飾的影響46-49
• 4.7 氧化性及還原性試劑在病原菌感染過程中對細胞整體水平及OSPF的谷胱甘肽化修飾的影響49-51
• 4.8 其它病原菌的效應(yīng)蛋白體內(nèi)谷胱甘肽化修飾51-53
• 第五章 討論與總結(jié)53-55
• 附團55-57
• 參考文獻57-63
• 致謝63-65
• 在讀期間所發(fā)表的論文與科研情況65
• 發(fā)表論文65
• 參加科研情況65

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  本文關(guān)鍵詞：宿主抵御病原菌入侵的新機制：病原菌效應(yīng)蛋白的谷胱甘肽化修飾，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：342235