為研究針對(duì)結(jié)核分枝桿菌潛伏感染的DNA疫苗,基于質(zhì)粒A39構(gòu)建了p-VAX1-Ag85B-Rv3425-Rv2029c-PPE26 （V569）質(zhì)粒DNA,并對(duì)其免疫原性及保護(hù)性進(jìn)行初步研究。免疫性評(píng)價(jià)試驗(yàn)共分6組:PBS、p-VAX1-Ag85B（A）、p-VAX1-Ag85B-Rv3425（A3）、A39、V569和BCG,采用左后腿肌內(nèi)注射C57BL/6小鼠,用流式細(xì)胞術(shù)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）分別檢測細(xì)胞免疫和體液免疫水平;構(gòu)建斑馬魚-海分枝桿菌潛伏感染模型,將PBS、A、A3、A39、BCG、V569分別通過腹腔注射免疫斑馬魚后,每日注射地塞米松10ug誘導(dǎo)海分枝桿菌復(fù)發(fā)感染,對(duì)斑馬魚肝臟進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)并繪制生存曲線。結(jié)果顯示,與BCG組相比,V569能引發(fā)實(shí)驗(yàn)小鼠強(qiáng)烈的細(xì)胞免疫反應(yīng)（IFN-γ高水平分泌）,外周血CD4⁺/CD8⁺ T細(xì)胞比例明顯增加。在斑馬魚-海分枝桿菌潛伏感染復(fù)發(fā)模型中,與BCG免疫組相比,V569免疫斑馬魚后可顯著減少其肝臟中海分枝桿菌... 

【文章來源】：微生物與感染. 2019,14(05)

【文章頁數(shù)】：8 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 V569質(zhì)粒的構(gòu)建
        1.2.2 重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HEK293T細(xì)胞驗(yàn)證質(zhì)粒編碼蛋白在真核細(xì)胞的表達(dá)
        1.2.3 小鼠免疫
        1.2.4 流式細(xì)胞術(shù)檢測眼球外周血CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞
        1.2.5 脾淋巴細(xì)胞分離和培養(yǎng)
        1.2.6 ELISA檢測脾淋巴細(xì)胞上清液中IFN-γ、IL-4的水平
        1.2.7 斑馬魚潛伏感染模型的構(gòu)建
        1.2.8 斑馬魚臟器菌落計(jì)數(shù)
        1.2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 重組質(zhì)粒DNA編碼蛋白可在轉(zhuǎn)染HEK293T細(xì)胞表達(dá)
    2.2 質(zhì)粒V569免疫小鼠可以促進(jìn)外周血CD4+、CD8+T細(xì)胞的增殖
    2.3 V569免疫可促進(jìn)IFN-γ的分泌
    2.4 質(zhì)粒V569可抑制斑馬魚-海分枝桿菌潛伏感染復(fù)發(fā)
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]針對(duì)潛伏結(jié)核感染的A39 DNA疫苗構(gòu)建及其免疫原性研究[J]. 宋娜,李光華,黃琪,孔聰,王洪海,徐穎.  微生物與感染. 2015(01)



本文編號(hào)：3402755