發(fā)布時(shí)間：2021-09-12 18:11

　　目的:應(yīng)用肌球蛋白ATP酶組織化學(xué)染色法分析并鑒定家兔骨骼肌及其培養(yǎng)細(xì)胞的肌細(xì)胞類型,并通過(guò)與相應(yīng)的MHC同工型基因表達(dá)水平進(jìn)行比較,探討肌球蛋白ATP酶組織化學(xué)染色法在體外培養(yǎng)肌細(xì)胞中應(yīng)用的可行性及其與肌纖維類型轉(zhuǎn)換過(guò)程的關(guān)系。方法:1取家兔慢肌纖維（I型,固有半膜肌亞部）和快肌纖維（Ⅱ型,副半膜肌背側(cè)亞部）通過(guò)ATP酶染色,鑒定肌纖維類型。2取家兔慢肌纖維和快肌纖維組織塊進(jìn)行細(xì)胞分離和原代培養(yǎng)并觀察。3待兩亞型肌細(xì)胞生長(zhǎng)良好后分別制作細(xì)胞爬片,并對(duì)第3天和第7天細(xì)胞爬片的細(xì)胞破膜后進(jìn)行ATP酶組織化學(xué)染色,觀察并鑒定肌細(xì)胞類型,并與MHC同工型基因檢測(cè)進(jìn)行比較驗(yàn)證。運(yùn)用RT-PCR檢測(cè)兩種肌細(xì)胞的MHC同工型基因的表達(dá)。結(jié)果:（1）家兔骨骼肌組織染色結(jié)果顯示,經(jīng)pH4.3的酸預(yù)孵流程后,I型肌纖維（即慢肌纖維）深染,II型肌纖維（即快肌纖維）淺染;反之,經(jīng)pH10.4的堿預(yù)孵流程后,II型肌纖維染色較深,而I型肌纖維則為淺染色。（2）分離并培養(yǎng)原代細(xì)胞,形成密度控制在1×10⁵/ml的成肌細(xì)胞體系留待后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。（3）第3天細(xì)胞爬片中,經(jīng)pH4.3的酸孵育流... 

【文章來(lái)源】：遵義醫(yī)科大學(xué)貴州省

【文章頁(yè)數(shù)】：55 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

固有半膜肌

棒攪拌均勻后分裝于 2 個(gè) 500ml 輸液瓶中標(biāo)記備用。1.2.10 堿性洗液：取 1L 藍(lán)口瓶，加入 517.5ml 0.35mol/L Tris 緩沖液，用 3mol/L溶液調(diào)節(jié) pH 至 9.4，加入超純水定容至 1L 后分裝至 2 個(gè) 500ml 輸液瓶中，標(biāo)記備1.2.11 2%CoCl2溶液：用電子天平稱量 3g 無(wú)水 CoCl2粉末，倒入 150ml 超純水中拌均勻。該溶液制備 2 份。1.2.12 1%(NH4)2S 溶液：用一次性吸管吸取 1.5ml(NH4)2S 溶液，加入 150ml 超純吹打混勻，由于該液體有刺激性氣味，現(xiàn)用現(xiàn)配。該溶液制備 2 份。1.3 實(shí)驗(yàn)方法1.3.1 實(shí)驗(yàn)家兔組織取材1.3.1.1 解剖取材：經(jīng)家兔耳緣靜脈空氣栓塞法處死實(shí)驗(yàn)家后固定于兔解剖臺(tái)上大腿后側(cè)局部兔毛剪除并噴灑酒精進(jìn)行消毒，鋪好無(wú)菌洞單，通過(guò)相對(duì)無(wú)菌手術(shù)取實(shí)驗(yàn)兔雙側(cè)大腿部位固有半膜肌（即 I 型慢肌纖維，呈紅色，見(jiàn)圖 1 示）和副肌的背側(cè)亞部（即 II 型快肌纖維，呈白色，見(jiàn)圖 2 示）組織。

遵義醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文 楊 瑾2.1 家兔兩型肌纖維組織化學(xué)染色結(jié)果冰凍切片鏡下觀察示肌纖維橫切面呈多邊形或不規(guī)則形，鋪路石樣分布，邊界較清晰。經(jīng) pH4.3 的酸預(yù)孵流程后，Ⅰ型肌纖維（固有半膜肌，慢肌纖維）染色較深（見(jiàn)圖 3 所示），Ⅱ型肌纖維（副半膜肌背側(cè)亞部，快肌纖維）染色相對(duì)較淺（見(jiàn)圖 4所示）；經(jīng) pH10.4 的堿預(yù)孵流程后，Ⅱ型肌纖維染色較深（見(jiàn)圖 6 所示），而Ⅰ型肌纖維較淺（見(jiàn)圖 5 所示）。肌組織著色較為單一。2 結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]不同強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)對(duì)骨骼肌纖維MHC亞型轉(zhuǎn)化及CaN/NFATc1信號(hào)通路的影響[J]. 尹麗琴,李范玲,湯長(zhǎng)發(fā),陶霞,劉文鋒,黃洪波,鄧勇,湯林.  中國(guó)應(yīng)用生理學(xué)雜志. 2017(04)
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碩士論文
[1]兩型骨骼肌纖維在體外培養(yǎng)過(guò)程中的相互轉(zhuǎn)換[D]. 陳穎.遵義醫(yī)學(xué)院 2016
[2]NR5A1/NR5A2在子癇前期患者蛻膜中的表達(dá)及功能研究[D]. 劉濤.山東師范大學(xué) 2015
[3]肌球蛋白Ⅱ單分子動(dòng)力沖程的研究[D]. 邱偉.內(nèi)蒙古大學(xué) 2011
[4]家兔半膜肌各亞部肌球蛋白重鏈表達(dá)差異的實(shí)驗(yàn)研究[D]. 陳淵.遵義醫(yī)學(xué)院 2011



本文編號(hào)：3394699