隨著分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)和基因工程技術(shù)的進(jìn)步,基因治療成為一種新型治療模式,在遺傳性疾病、惡性腫瘤、心血管疾病、艾滋病等疾病的治療中有著廣闊的運(yùn)用前景。基因治療載體的選擇是基因治療成敗的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。基因治療載體包括病毒載體、非病毒載體和細(xì)菌載體。非病毒載體具有較低的免疫原性、低細(xì)胞毒性、較大的基因負(fù)載量、制備簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn),顯示了其作為基因治療載體的優(yōu)越性。本實(shí)驗(yàn)室前期工作表明,TAT-LHRH修飾的殼聚糖/DNA納米粒（TLCDN）呈現(xiàn)出對(duì)HepG2較高的轉(zhuǎn)染效率和靶向性,但其以何種方式進(jìn)入細(xì)胞尚不清楚。本研究通過(guò)攝入抑制實(shí)驗(yàn)、共定位實(shí)驗(yàn)以及阻斷不同細(xì)胞內(nèi)吞途徑對(duì)基因轉(zhuǎn)染效率的影響三部分實(shí)驗(yàn),旨在探索TAT-LHRH修飾的殼聚糖/DNA納米粒的細(xì)胞內(nèi)吞途徑。采用復(fù)凝集法,將熒光標(biāo)記的質(zhì)粒DNA與TAT-LHRH修飾的殼聚糖或未經(jīng)修飾的殼聚糖混合制備TLCDN和殼聚糖/DNA納米粒（CDN）。觀察3種內(nèi)吞途徑抑制劑chlorpromazine（CPM）、filipin（FP）或dynasore（DS）對(duì)HepG2細(xì)胞攝入TLCDN或CDN的影響,同時(shí)檢測(cè)攝入抑制后的基因轉(zhuǎn)染效率。再者,將T... 

【文章來(lái)源】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：61 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 緒論
    1. 基因治療及其載體分類
        1.1. 病毒載體的分類及特點(diǎn)
        1.2. 非病毒載體的分類及特點(diǎn)
        1.3. 細(xì)菌載體分類及特點(diǎn)
        1.4. 小結(jié)
    2. 細(xì)胞內(nèi)吞及細(xì)胞內(nèi)吞途徑分類
        2.1. 吞噬作用
        2.2. 網(wǎng)格蛋白依賴性細(xì)胞內(nèi)吞
        2.3. 小窩蛋白介導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)吞
        2.4. 非網(wǎng)格蛋白和非小窩蛋白依賴性細(xì)胞內(nèi)吞
        2.5. 巨胞飲
        2.6. 小結(jié)
    3. 課題的提出
第二章 攝入抑制實(shí)驗(yàn)
    1. 試劑、耗材和儀器
        1.1. 試劑及耗材
        1.2. 儀器
    2. 主要試劑的配制
        2.1. 緩沖液配制
        2.2. 內(nèi)吞途徑抑制劑溶液的配置
        2.3. 其它溶液的配置
    3. 實(shí)驗(yàn)方法
        3.1. 質(zhì)粒DNA pGL3-Control的提取及熒光標(biāo)記
        3.2. TAT-LHRH-CS共聚物的制備
        3.3. 用TAT-LHRH-CS或CS和fDNA制備納米粒
        3.4. 攝入抑制實(shí)驗(yàn)
        3.5. 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    4. 結(jié)果與討論
    5. 本章小結(jié)
第三章 共定位實(shí)驗(yàn)
    1. 試劑、耗材和儀器
        1.1. 試劑及耗材
        1.2. 儀器
    2. 主要試劑的配制
        2.1. 緩沖液配制
        2.2. 內(nèi)吞途徑標(biāo)志物溶液的配置
        2.3. 其它溶液的配置
    3. 實(shí)驗(yàn)方法
        3.1. 質(zhì)粒DNA pGL3-Control的提取及熒光標(biāo)記
        3.2. TAT-LHRH-CS共聚物的制備
        3.3. 用TAT-LHRH-CS或CS和fDNA制備納米粒
        3.4. 共定位實(shí)驗(yàn)
        3.5. 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    4. 結(jié)果與討論
    5. 本章小結(jié)
第四章 阻斷不同細(xì)胞內(nèi)吞途徑對(duì)基因轉(zhuǎn)染效率的影響
    1. 試劑、耗材和儀器
        1.1. 試劑及耗材
        1.2. 儀器
    2. 主要試劑的配制
        2.1. 緩沖液配制
        2.2. 內(nèi)吞途徑抑制劑溶液的配置
        2.3. 其它溶液的配置
    3. 實(shí)驗(yàn)方法
        3.1. 質(zhì)粒DNA pGL3-Control的提取
        3.2. TAT-LHRH-CS共聚物的制備
        3.3. 用TAT-LHRH-CS或CS和DNA制備納米粒
        3.4. 阻斷不同內(nèi)吞途徑對(duì)基因轉(zhuǎn)染效率的影響
        3.5. 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    4. 結(jié)果與討論
    5. 本章小結(jié)
全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
附錄：文中所用到的主要實(shí)驗(yàn)方法
    1. HepG2細(xì)胞的復(fù)蘇、傳代及保存
        1.1. HepG2細(xì)胞的復(fù)蘇
        1.2. HepG2細(xì)胞的傳代
        1.3. HepG2細(xì)胞的保存
    2. 含質(zhì)粒DNA pGL3-Control的大腸桿菌DH5a的培養(yǎng)
    3. 質(zhì)粒DNA pGL3-Control的提取
    4. 質(zhì)粒DNA pGL3-Control的熒光標(biāo)記
    5. 熒光素酶檢測(cè)
    6. BCA法測(cè)定細(xì)胞蛋白含量
致謝



本文編號(hào)：3381899