目的建立小鼠來源調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Tregs）體外擴(kuò)增培養(yǎng)方法,并檢測(cè)擴(kuò)增細(xì)胞的表型及體外免疫抑制功能,為Tregs應(yīng)用于臨床免疫治療提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法利用免疫磁珠分離（MACS）方法從BALB/c小鼠脾臟中分選出CD4+T細(xì)胞,加入anti-CD3/CD28抗體、100 U/ml白細(xì)胞介素-2（IL-2）和5 ng/ml重組人轉(zhuǎn)化生長因子β（rhTGF-β）體外擴(kuò)增5 d。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)擴(kuò)增后Tregs純度及免疫抑制功能,臺(tái)盼藍(lán)染色法測(cè)定擴(kuò)增后Tregs的數(shù)量和活性。結(jié)果擴(kuò)增5 d后Tregs數(shù)目約為新鮮分選CD4+T細(xì)胞的20倍,細(xì)胞活性為（93±4）%。擴(kuò)增得到的Tregs純度為（79. 1±1. 5）%且具有免疫抑制功能。結(jié)論本實(shí)驗(yàn)方法可以大量擴(kuò)增出高純度且具有免疫抑制功能的Tregs,解決了Tregs數(shù)目少的問題,有利于進(jìn)一步的免疫研究和治療。 

【文章來源】：中國醫(yī)師雜志. 2019,21(10)

【文章頁數(shù)】：4 頁

【部分圖文】：

流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞純度A:新鮮分選的CD4+T細(xì)胞;B:擴(kuò)增后的CD4+Foxp3+Tregs;Tregs:調(diào)節(jié)性T細(xì)胞

圖2擴(kuò)增后調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Tregs)免疫抑制功能檢測(cè)m為Teff增值比例;A為Teff+anti-CD3/CD28;B為Teff∶Tregs=1∶1+anti-CD3/CD28;C為Teff∶Tregs=1∶2+anti-CD3/CD28增5d，能得到數(shù)目約為新鮮分選CD4+T細(xì)胞20倍的Tregs［新鮮分選的CD4+T細(xì)胞數(shù)量為(5.3±0.6)×106;擴(kuò)增后Tregs數(shù)量為(102±4)×106］，臺(tái)盼藍(lán)染色顯示活細(xì)胞率為(93±4)%，見圖3。圖3擴(kuò)增后調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Tregs)數(shù)量及活力A:Tregs數(shù)量;B:Tregs活力3討論Tregs是Sakaguchi等在1995年首次報(bào)道的一種具有免疫調(diào)節(jié)功能的T細(xì)胞亞群［5］，根據(jù)來源和效應(yīng)機(jī)制分為兩大類:一類是胸腺來源的天然調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(naturalregulatoryTcells，nTregs)，其特征標(biāo)志為高表達(dá)轉(zhuǎn)錄因子Foxp3，構(gòu)成性表達(dá)IL-2受體的α鏈(CD25)，分泌TGF-β和IL-10［6］。另一類是外周誘導(dǎo)得到的誘導(dǎo)性調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(inducedregulatoryTcells，iTregs)，是在小劑量抗原或免疫抑制性細(xì)胞因子誘導(dǎo)下由外周幼稚T淋巴細(xì)胞發(fā)育而成，包括高分泌IL-10的Tr1和高分泌TGF-β的Th3兩個(gè)亞群，這兩個(gè)亞群表達(dá)或不表達(dá)Foxp3［7］。目前研究表明，Tregs通過分泌抗炎癥細(xì)胞因子(如TGF-β、IL-10)或通過細(xì)胞之間接觸［如Tregs表面細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞抗原(CytotoxicT-LymphocyteAntigen4，4CTLA-4)與抗原提呈細(xì)胞(AntigenPres-entingCells，APCs)表面CD80/CD86］，負(fù)向調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)［8］。因此，Tregs在維持自身免疫耐受中起著重要作用?

圖2擴(kuò)增后調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Tregs)免疫抑制功能檢測(cè)m為Teff增值比例;A為Teff+anti-CD3/CD28;B為Teff∶Tregs=1∶1+anti-CD3/CD28;C為Teff∶Tregs=1∶2+anti-CD3/CD28增5d，能得到數(shù)目約為新鮮分選CD4+T細(xì)胞20倍的Tregs［新鮮分選的CD4+T細(xì)胞數(shù)量為(5.3±0.6)×106;擴(kuò)增后Tregs數(shù)量為(102±4)×106］，臺(tái)盼藍(lán)染色顯示活細(xì)胞率為(93±4)%，見圖3。圖3擴(kuò)增后調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Tregs)數(shù)量及活力A:Tregs數(shù)量;B:Tregs活力3討論Tregs是Sakaguchi等在1995年首次報(bào)道的一種具有免疫調(diào)節(jié)功能的T細(xì)胞亞群［5］，根據(jù)來源和效應(yīng)機(jī)制分為兩大類:一類是胸腺來源的天然調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(naturalregulatoryTcells，nTregs)，其特征標(biāo)志為高表達(dá)轉(zhuǎn)錄因子Foxp3，構(gòu)成性表達(dá)IL-2受體的α鏈(CD25)，分泌TGF-β和IL-10［6］。另一類是外周誘導(dǎo)得到的誘導(dǎo)性調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(inducedregulatoryTcells，iTregs)，是在小劑量抗原或免疫抑制性細(xì)胞因子誘導(dǎo)下由外周幼稚T淋巴細(xì)胞發(fā)育而成，包括高分泌IL-10的Tr1和高分泌TGF-β的Th3兩個(gè)亞群，這兩個(gè)亞群表達(dá)或不表達(dá)Foxp3［7］。目前研究表明，Tregs通過分泌抗炎癥細(xì)胞因子(如TGF-β、IL-10)或通過細(xì)胞之間接觸［如Tregs表面細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞抗原(CytotoxicT-LymphocyteAntigen4，4CTLA-4)與抗原提呈細(xì)胞(AntigenPres-entingCells，APCs)表面CD80/CD86］，負(fù)向調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)［8］。因此，Tregs在維持自身免疫耐受中起著重要作用?

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3375654