目的建立小鼠來源調節(jié)性T細胞（Tregs）體外擴增培養(yǎng)方法,并檢測擴增細胞的表型及體外免疫抑制功能,為Tregs應用于臨床免疫治療提供實驗基礎。方法利用免疫磁珠分離（MACS）方法從BALB/c小鼠脾臟中分選出CD4+T細胞,加入anti-CD3/CD28抗體、100 U/ml白細胞介素-2（IL-2）和5 ng/ml重組人轉化生長因子β（rhTGF-β）體外擴增5 d。流式細胞術檢測擴增后Tregs純度及免疫抑制功能,臺盼藍染色法測定擴增后Tregs的數量和活性。結果擴增5 d后Tregs數目約為新鮮分選CD4+T細胞的20倍,細胞活性為（93±4）%。擴增得到的Tregs純度為（79. 1±1. 5）%且具有免疫抑制功能。結論本實驗方法可以大量擴增出高純度且具有免疫抑制功能的Tregs,解決了Tregs數目少的問題,有利于進一步的免疫研究和治療。 

【文章來源】：中國醫(yī)師雜志. 2019,21(10)

【文章頁數】：4 頁

【部分圖文】：

流式細胞術檢測細胞純度A:新鮮分選的CD4+T細胞;B:擴增后的CD4+Foxp3+Tregs;Tregs:調節(jié)性T細胞

圖2擴增后調節(jié)性T細胞(Tregs)免疫抑制功能檢測m為Teff增值比例;A為Teff+anti-CD3/CD28;B為Teff∶Tregs=1∶1+anti-CD3/CD28;C為Teff∶Tregs=1∶2+anti-CD3/CD28增5d，能得到數目約為新鮮分選CD4+T細胞20倍的Tregs［新鮮分選的CD4+T細胞數量為(5.3±0.6)×106;擴增后Tregs數量為(102±4)×106］，臺盼藍染色顯示活細胞率為(93±4)%，見圖3。圖3擴增后調節(jié)性T細胞(Tregs)數量及活力A:Tregs數量;B:Tregs活力3討論Tregs是Sakaguchi等在1995年首次報道的一種具有免疫調節(jié)功能的T細胞亞群［5］，根據來源和效應機制分為兩大類:一類是胸腺來源的天然調節(jié)性T細胞(naturalregulatoryTcells，nTregs)，其特征標志為高表達轉錄因子Foxp3，構成性表達IL-2受體的α鏈(CD25)，分泌TGF-β和IL-10［6］。另一類是外周誘導得到的誘導性調節(jié)性T細胞(inducedregulatoryTcells，iTregs)，是在小劑量抗原或免疫抑制性細胞因子誘導下由外周幼稚T淋巴細胞發(fā)育而成，包括高分泌IL-10的Tr1和高分泌TGF-β的Th3兩個亞群，這兩個亞群表達或不表達Foxp3［7］。目前研究表明，Tregs通過分泌抗炎癥細胞因子(如TGF-β、IL-10)或通過細胞之間接觸［如Tregs表面細胞毒性T淋巴細胞抗原(CytotoxicT-LymphocyteAntigen4，4CTLA-4)與抗原提呈細胞(AntigenPres-entingCells，APCs)表面CD80/CD86］，負向調節(jié)免疫反應［8］。因此，Tregs在維持自身免疫耐受中起著重要作用?

圖2擴增后調節(jié)性T細胞(Tregs)免疫抑制功能檢測m為Teff增值比例;A為Teff+anti-CD3/CD28;B為Teff∶Tregs=1∶1+anti-CD3/CD28;C為Teff∶Tregs=1∶2+anti-CD3/CD28增5d，能得到數目約為新鮮分選CD4+T細胞20倍的Tregs［新鮮分選的CD4+T細胞數量為(5.3±0.6)×106;擴增后Tregs數量為(102±4)×106］，臺盼藍染色顯示活細胞率為(93±4)%，見圖3。圖3擴增后調節(jié)性T細胞(Tregs)數量及活力A:Tregs數量;B:Tregs活力3討論Tregs是Sakaguchi等在1995年首次報道的一種具有免疫調節(jié)功能的T細胞亞群［5］，根據來源和效應機制分為兩大類:一類是胸腺來源的天然調節(jié)性T細胞(naturalregulatoryTcells，nTregs)，其特征標志為高表達轉錄因子Foxp3，構成性表達IL-2受體的α鏈(CD25)，分泌TGF-β和IL-10［6］。另一類是外周誘導得到的誘導性調節(jié)性T細胞(inducedregulatoryTcells，iTregs)，是在小劑量抗原或免疫抑制性細胞因子誘導下由外周幼稚T淋巴細胞發(fā)育而成，包括高分泌IL-10的Tr1和高分泌TGF-β的Th3兩個亞群，這兩個亞群表達或不表達Foxp3［7］。目前研究表明，Tregs通過分泌抗炎癥細胞因子(如TGF-β、IL-10)或通過細胞之間接觸［如Tregs表面細胞毒性T淋巴細胞抗原(CytotoxicT-LymphocyteAntigen4，4CTLA-4)與抗原提呈細胞(AntigenPres-entingCells，APCs)表面CD80/CD86］，負向調節(jié)免疫反應［8］。因此，Tregs在維持自身免疫耐受中起著重要作用?

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3375654