利用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（HPLC/MS）法對(duì)體液中微量的羧酸化合物進(jìn)行定量檢測(cè)仍然是一個(gè)難題。近年的研究顯示采用衍生化質(zhì)譜增敏法成為解決這一問題的重要方法。本文綜述了近年來應(yīng)用此類方法測(cè)定微量羧酸物質(zhì)的研究,并對(duì)研究中所采用的衍生化試劑和化學(xué)反應(yīng)進(jìn)行了總結(jié)。 

【文章來源】：藥學(xué)研究. 2019,38(11)

【文章頁(yè)數(shù)】：6 頁(yè)

【部分圖文】：

羧酸類物質(zhì)與DMT－1(S)－Apy或DMT－3(S)－Apy的反應(yīng)ShoujiroOgawa課題組還開發(fā)了一種新的衍生化試劑(S)(二甲氨基苯基羰基)氨基吡啶()對(duì)手性

－甲基嗎啉存在下，與羧酸［3－羥基吡啶酸(3－OH－PA)，2－(－羧乙基－6－羥基三甲基色曼(γ－CEHC)］和依托多酸反應(yīng)迅速，形成酰胺鍵［6］。結(jié)果表明，ANA－衍生物在ESI－MS正離子模式具能高度響應(yīng)，在MS/MS中產(chǎn)生特征產(chǎn)物離子，從而可以通過選擇性的反應(yīng)監(jiān)測(cè)進(jìn)行靈敏的檢測(cè)。ANA－衍生物的測(cè)定響應(yīng)比全羧酸提高了20～160倍，檢出限在低濃度微孔范圍(1．8～11fmol)。圖3羧酸類物質(zhì)與DMT－1(S)－Apy或DMT－3(S)－Apy的反應(yīng)圖4手型羧酸與ANA的反應(yīng)ShoujiroOgawa課題組還開發(fā)了一種新的衍生化試劑(S)－1－(4－二甲氨基苯基羰基)－3－氨基吡啶(1－DADAP)對(duì)手性羧酸在LC/MS中檢出和分離(見圖5)。不同于衍生化前的低靈敏度，低分離效果，1－DAPAP在4－(4，6－二甲氧基－1，3，5－三嗪－2－�；�)－4－甲基嗎啉存在下，與羧酸在室溫下反應(yīng)5min。所得衍生物含有酰胺鍵，它在ESI－MS正離子模式下響應(yīng)劇烈，在MS/MS中產(chǎn)生特征產(chǎn)物離子，使選擇性反應(yīng)監(jiān)測(cè)的靈敏度提高。1－DAPAP－衍生物的檢測(cè)響應(yīng)比完整的羧酸在柱上提高10～1100倍，檢測(cè)范圍分別為0．97fmol。圖5手型羧酸與1－DADAP的反應(yīng)利用ANA和1－DAPAP衍生化對(duì)手性羧酸的拆分都是有效的。尤其是1－DAPAP的衍生化對(duì)羧酸的拆分值為1．243，該衍生化方法能夠成功地應(yīng)用于生物樣品分析。在實(shí)際應(yīng)用中，經(jīng)過衍生化后，人唾液中微量布洛芬和萘普生可以在LC/ESI－MS/MS得到很好的分離和檢測(cè)，并且具有操作簡(jiǎn)單，樣品用量小而靈敏度高的優(yōu)點(diǎn)［7］。Noortj

用4－BNMA后的6min內(nèi)，原羧酸濃度在0．2～44μg之間的檢測(cè)限可以提高2～3倍。該方法已成功應(yīng)用于體內(nèi)外模型。2通過其他化學(xué)鍵進(jìn)行衍生化TaoMa課題組在2015年開發(fā)了一種衍生化試劑2－(5－苯并吖啶)乙基－對(duì)甲苯磺酸酯［10］(BAETS)用來測(cè)定藥材中三萜酸的含量。通過ＲP－HPLC－FLD－MS柱前衍生化法使用這種試劑可以同時(shí)測(cè)定5種三萜酸:積雪草酸、山楂酸、科羅索酸、齊墩果酸和樺木酸。這個(gè)方法有利于更好地鑒定化學(xué)成分(見圖8)。圖6唾液酸與EPC的反應(yīng)圖7羧酸類物質(zhì)與4－BNMA的反應(yīng)圖8三萜酸與BAETS的反應(yīng)Xian－EnZhao課題組在2016年設(shè)計(jì)了衍生化試劑4－羰基氯羅沙明(CCＲ)來分析神經(jīng)遞質(zhì)(NTs)的含量。NTs可能在神經(jīng)退行性疾病如阿爾茨海默病(AD)中發(fā)揮重要作用。為了研究它與疾病間潛在的聯(lián)系，Xian－EnZhao開發(fā)了一個(gè)新的簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確基于原位超聲輔助衍生化分散的靈敏分析方法。將液－液微萃取(原位UA－DDLLME)與UPLC－MS/MS相結(jié)合，用此方法成功進(jìn)行了AD大鼠尿液中的氨基酸神經(jīng)遞質(zhì)(AANT)和單胺神經(jīng)遞質(zhì)(MANTs)的定量分析(見圖9)。因?yàn)槲唇?jīng)衍生化處理的NTs存在于生物樣品中濃度低，化學(xué)性質(zhì)不穩(wěn)定，并且還存在共洗脫的潛在色譜干擾。所以在一個(gè)步驟中同時(shí)進(jìn)行衍生化和分析物的微萃取可以簡(jiǎn)化分析樣品提取步驟，減少樣品和溶劑的消耗，提高靈敏度。這是一種在以前沒有用于生物樣品中NTs的分析手段。CCＲ用于分析NTs時(shí)有衍生條件溫和，易于處理和檢測(cè)靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)［11］。這種方法可能是阿爾茨海?


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