利用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（HPLC/MS）法對體液中微量的羧酸化合物進行定量檢測仍然是一個難題。近年的研究顯示采用衍生化質(zhì)譜增敏法成為解決這一問題的重要方法。本文綜述了近年來應(yīng)用此類方法測定微量羧酸物質(zhì)的研究,并對研究中所采用的衍生化試劑和化學(xué)反應(yīng)進行了總結(jié)。 

【文章來源】：藥學(xué)研究. 2019,38(11)

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

羧酸類物質(zhì)與DMT－1(S)－Apy或DMT－3(S)－Apy的反應(yīng)ShoujiroOgawa課題組還開發(fā)了一種新的衍生化試劑(S)(二甲氨基苯基羰基)氨基吡啶()對手性

－甲基嗎啉存在下，與羧酸［3－羥基吡啶酸(3－OH－PA)，2－(－羧乙基－6－羥基三甲基色曼(γ－CEHC)］和依托多酸反應(yīng)迅速，形成酰胺鍵［6］。結(jié)果表明，ANA－衍生物在ESI－MS正離子模式具能高度響應(yīng)，在MS/MS中產(chǎn)生特征產(chǎn)物離子，從而可以通過選擇性的反應(yīng)監(jiān)測進行靈敏的檢測。ANA－衍生物的測定響應(yīng)比全羧酸提高了20～160倍，檢出限在低濃度微孔范圍(1．8～11fmol)。圖3羧酸類物質(zhì)與DMT－1(S)－Apy或DMT－3(S)－Apy的反應(yīng)圖4手型羧酸與ANA的反應(yīng)ShoujiroOgawa課題組還開發(fā)了一種新的衍生化試劑(S)－1－(4－二甲氨基苯基羰基)－3－氨基吡啶(1－DADAP)對手性羧酸在LC/MS中檢出和分離(見圖5)。不同于衍生化前的低靈敏度，低分離效果，1－DAPAP在4－(4，6－二甲氧基－1，3，5－三嗪－2－�；�)－4－甲基嗎啉存在下，與羧酸在室溫下反應(yīng)5min。所得衍生物含有酰胺鍵，它在ESI－MS正離子模式下響應(yīng)劇烈，在MS/MS中產(chǎn)生特征產(chǎn)物離子，使選擇性反應(yīng)監(jiān)測的靈敏度提高。1－DAPAP－衍生物的檢測響應(yīng)比完整的羧酸在柱上提高10～1100倍，檢測范圍分別為0．97fmol。圖5手型羧酸與1－DADAP的反應(yīng)利用ANA和1－DAPAP衍生化對手性羧酸的拆分都是有效的。尤其是1－DAPAP的衍生化對羧酸的拆分值為1．243，該衍生化方法能夠成功地應(yīng)用于生物樣品分析。在實際應(yīng)用中，經(jīng)過衍生化后，人唾液中微量布洛芬和萘普生可以在LC/ESI－MS/MS得到很好的分離和檢測，并且具有操作簡單，樣品用量小而靈敏度高的優(yōu)點［7］。Noortj

用4－BNMA后的6min內(nèi)，原羧酸濃度在0．2～44μg之間的檢測限可以提高2～3倍。該方法已成功應(yīng)用于體內(nèi)外模型。2通過其他化學(xué)鍵進行衍生化TaoMa課題組在2015年開發(fā)了一種衍生化試劑2－(5－苯并吖啶)乙基－對甲苯磺酸酯［10］(BAETS)用來測定藥材中三萜酸的含量。通過ＲP－HPLC－FLD－MS柱前衍生化法使用這種試劑可以同時測定5種三萜酸:積雪草酸、山楂酸、科羅索酸、齊墩果酸和樺木酸。這個方法有利于更好地鑒定化學(xué)成分(見圖8)。圖6唾液酸與EPC的反應(yīng)圖7羧酸類物質(zhì)與4－BNMA的反應(yīng)圖8三萜酸與BAETS的反應(yīng)Xian－EnZhao課題組在2016年設(shè)計了衍生化試劑4－羰基氯羅沙明(CCＲ)來分析神經(jīng)遞質(zhì)(NTs)的含量。NTs可能在神經(jīng)退行性疾病如阿爾茨海默病(AD)中發(fā)揮重要作用。為了研究它與疾病間潛在的聯(lián)系，Xian－EnZhao開發(fā)了一個新的簡單、快速、準確基于原位超聲輔助衍生化分散的靈敏分析方法。將液－液微萃取(原位UA－DDLLME)與UPLC－MS/MS相結(jié)合，用此方法成功進行了AD大鼠尿液中的氨基酸神經(jīng)遞質(zhì)(AANT)和單胺神經(jīng)遞質(zhì)(MANTs)的定量分析(見圖9)。因為未經(jīng)衍生化處理的NTs存在于生物樣品中濃度低，化學(xué)性質(zhì)不穩(wěn)定，并且還存在共洗脫的潛在色譜干擾。所以在一個步驟中同時進行衍生化和分析物的微萃取可以簡化分析樣品提取步驟，減少樣品和溶劑的消耗，提高靈敏度。這是一種在以前沒有用于生物樣品中NTs的分析手段。CCＲ用于分析NTs時有衍生條件溫和，易于處理和檢測靈敏度高等優(yōu)點［11］。這種方法可能是阿爾茨海?


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