目的:探究T細(xì)胞攜載人IL-12基因?qū)細(xì)胞生長和功能的影響。方法:構(gòu)建表達(dá)人IL-12基因的PiggyBac轉(zhuǎn)座子載體,在電轉(zhuǎn)下,將攜載IL-12基因的轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)導(dǎo)入新鮮分離的淋巴細(xì)胞獲得持續(xù)穩(wěn)定表達(dá)。通過T細(xì)胞表型分析及體外功能實驗研究初步探討T細(xì)胞攜載IL-12基因的可行性。結(jié)果:借助電轉(zhuǎn)可將攜載有IL-12基因的PiggyBac轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)高效導(dǎo)入新鮮分離的淋巴細(xì)胞并獲得高效穩(wěn)定表達(dá);IL-12的分泌可促進(jìn)T細(xì)胞增殖,增加CD4陽性細(xì)胞百分比;攜載IL-12基因的T細(xì)胞在腫瘤細(xì)胞刺激下可進(jìn)一步促進(jìn)IL-12分泌,增強(qiáng)T細(xì)胞的殺瘤活性。結(jié)論:在電場作用下,Piggybac轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)可將人IL-12基因高效載入并整合至T細(xì)胞基因組獲得持續(xù)穩(wěn)定表達(dá),分泌的功能性IL-12可促進(jìn)T細(xì)胞增殖,增強(qiáng)殺瘤活性。 

【文章來源】：中國免疫學(xué)雜志. 2019,35(21)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：5 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 IL-12過表達(dá)載體的構(gòu)建
        1.2.2 IL-12與PiggyBac轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)連接的克隆形成
        1.2.3 IL-12陽性克隆的鑒定
        1.2.4 人外周血PBMC的分離
        1.2.5 PBMC的電轉(zhuǎn)及T細(xì)胞的體外擴(kuò)增
        1.2.6 IL-12在T細(xì)胞中的表達(dá)檢測
        1.2.7 T細(xì)胞表型分析
        1.2.8 T細(xì)胞殺傷能力檢測
    1.3 統(tǒng)計學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 IL-12載體的成功構(gòu)建
    2.2 構(gòu)建的IL-12可在T細(xì)胞中形成具有生物學(xué)活性的IL-12蛋白
    2.3 T細(xì)胞表型分析
    2.4 IL-12分泌可促進(jìn)T細(xì)胞的殺傷能力
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]2018年國內(nèi)外免疫學(xué)研究重要進(jìn)展[J]. 劉娟,曹雪濤.  中國免疫學(xué)雜志. 2019(01)
[2]實體瘤CART治療面臨的挑戰(zhàn)[J]. 丁爍,趙磊,Rojina Shilpakar,魏云巍.  中國免疫學(xué)雜志. 2018(04)



本文編號：3353708