HNF4α,肝細(xì)胞核因子α,是肝臟發(fā)育和維持穩(wěn)態(tài)過程中的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子。在已有的研究中已經(jīng)有很多報(bào)道稱HNF4α在肝細(xì)胞癌樣品中的表達(dá)量下降,更有報(bào)道詳細(xì)說明了 HNF4α抑制肝細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展的能力和具體分子機(jī)理。Hippo信號通路作為調(diào)控細(xì)胞增殖與分化的重要信號通路,其調(diào)控轉(zhuǎn)錄的核心轉(zhuǎn)錄因子蛋白YAP是典型的原癌基因。YAP在多種癌癥中均有不同程度的上調(diào),尤其在肝細(xì)胞癌中幅度大,范圍廣,表明其與肝癌的發(fā)生發(fā)展有重要關(guān)系。本課題組在此前已經(jīng)對HNF4α和YAP1-TEAD轉(zhuǎn)錄因子集團(tuán)之間的關(guān)系進(jìn)行了深入細(xì)致的研究,并發(fā)現(xiàn)了 HNF4α可以通過與YAP1競爭性結(jié)合TEAD的方式抑制YAP1-TEAD下游靶基因的活性。在本文中,我們利用了細(xì)胞,大鼠,小鼠模型,通過western blot,實(shí)時熒光定量PCR,Luciferase,免疫組化等實(shí)驗(yàn),從不同角度闡述了內(nèi)源情況下HNF4α對YAP1-TEAD轉(zhuǎn)錄因子集團(tuán)的抑制作用。由于YAP在肝細(xì)胞癌中作用的廣譜性,我們的研究為未來的肝細(xì)胞癌治療方法提供了新的思路,通過HNF4α蛋白來抑制Hippo信號通路下游靶基因的活性,并進(jìn)一步抑制肝細(xì)胞癌的發(fā)... 

【文章來源】：廈門大學(xué)福建省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１．２?Ｈｉｐｐ？信號通路結(jié)構(gòu)??Ｆｉｇｕｒｅｌ．２?Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｏｆ?Ｈｉｐｐｏ?ｓｉｇｎａｌｉｎｇ?ｐａｔｈｗａｙ??

Ｆｉｇｕｒｅ３．１?Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ＹＡＰ?ａｎｄ?ＨＮＦ４ａ?ｉｎ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｈｅｐａｔｏｍａ?ｃｅｌｌ?ｌｉｎｅｓ??３．２?ＨＮＦ４ａ與ＹＡＰｌ競爭性結(jié)合ＴＥＡＤ從而抑制ＹＡＰ１－ＴＥＡＤ的下游靶??基因表達(dá)水平??３．２．１?ＴＥＡＤ１和ＴＥＡＤ４在肝細(xì)胞癌中起主要作用??為保證實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性，我們首先在多種肝癌細(xì)胞系中檢測了?ＴＥＡＤ轉(zhuǎn)錄子家族四個主要成員蛋白的相對ｍＲＮＡ表達(dá)量。由圖３．２司見，在六種４、同的??肝癌細(xì)胞系中，ＴＥＡＤ４均表現(xiàn)出了較高的表達(dá)量，ＴＥＡＤ１在除ＨｅｐＧ２之外的??其他細(xì)胞系中也均有較高表達(dá)，而ＴＥＡＤ２和ＴＥＡＤ３則在大多數(shù)肝癌細(xì)胞系中??都呈現(xiàn)低表達(dá)狀況（圖３．２）。因此我們認(rèn)為，ＴＥＡＤ１和ＴＥＡＤ４在肝癌中起到主??

下游靶基因的檢測中，我們選取了?ＣＴＧＦ，ＣＣＮＤ１，ＣＹＲ６１和ＥＤＮ１作為檢測??目標(biāo)�？梢钥吹�，在陽性對照組中，四個靶基因均發(fā)生了明顯的上調(diào)，而過表達(dá)??了?ＨＮＦ４ａ的實(shí)驗(yàn)組則有效的回調(diào)了四個靶基因（圖３．１０）。??ｗ?３〇，?—?■?ＷＴ＋ａｄ－ＧＦＰ??ＷＴ?ＤＫＯ?ＤＫＯ?｜?Ｔ＊?■?ＤＫＯ＋ａｄ－ＧＦＰ??ａｄ－ＧＦＰ?ａｄ－ＧＦＰ?ａｄ－ＨＮＦ４ｃ?＾?＾?ｇ?■?ＤＫＯ＋ａｄ－ＨＮＦ４ａ??ＹＡＰ１?一一—■上?？廣??ｐＹＡＰ１?＊—?Ｉ?ｉ〇－?ｌ｜?＾??ＨＮＦ４ａ??????｜?５－?■■矗．．??ｐ－ａｃｔｉｎ?｜＿■＂丨－ｍ—ｐ—＞一?■，一?ａ?ｏ??ＣＴＧＦ?ＣＣＮＤ１?ＣＹＲ６１?ＥＤＮ１??圖３．?１０?ＨＮＦ４ａ回調(diào)ＹＡＰｌ－ＴＥＡＤ下游勒基因的表達(dá)??Ｆｉｇｕｒｅ３．１０?ＨＮＦ４ａ?ｒｅｐｒｅｓｓｅｄ?ＹＡＰ１－ＴＥＡＤ?ｄｏｗｎｓｔｒｅａｍ?ｇｅｎｅ?ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，??ｄｅｔｅｃｔｅｄ?ｂｙ?ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ?ａｎｄ?Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ?ＰＣＲ??接著我們對部分肝組織進(jìn)行了石蠟包埋和切片，然后對切片進(jìn)行了免疫組化??實(shí)驗(yàn)，所得結(jié)果基本和蛋白及ＲＮＡ的檢測實(shí)驗(yàn)一致。對比陰性對照組，陽性對照??組和實(shí)驗(yàn)組的ＹＡＰ１表達(dá)有明顯上調(diào)，并伴有增強(qiáng)的核定位，而ｐＹＡＰｌ則有明??顯下調(diào)。ＨＮＦ４ａ在注射了過表達(dá)腺病毒的實(shí)驗(yàn)組上調(diào)明顯，并且基本都定位在??核內(nèi)


本文編號：3353535