發(fā)布時間：2017-04-29 00:06

  本文關(guān)鍵詞：肺炎克雷伯菌裂解性噬菌體的分離和鑒定，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：肺炎克雷伯菌（Klebsiella pneumoniae）屬腸桿菌科細(xì)菌、革蘭染色陰性桿菌，是引起醫(yī)院內(nèi)感染的病原菌之。肺炎克雷伯菌引起的侵襲性感染可導(dǎo)致器官（如腎臟、脾臟、大腦和前列腺）和組織的膿腫，特別是近年來，由肺炎克雷伯菌引起的社區(qū)獲得性(community-acquired)的化膿性肝膿腫有增加的趨勢。此外，，攜帶編碼超廣譜β-內(nèi)酰胺酶（extended-spectrumbeta-lactamases, ESBLs）質(zhì)粒的多重耐藥肺炎克雷伯菌所致醫(yī)院內(nèi)感染的報告也逐年上升。多重耐藥細(xì)菌的不斷出現(xiàn)方面導(dǎo)致抗生素療效的下降，另方面亦大大增加了耐藥性細(xì)菌在病人體內(nèi)定植的可能性。噬菌體是種可以特異性裂解細(xì)菌的病毒，廣泛存在于自然界。利用噬菌體治療細(xì)菌性感染，稱為噬菌體療法。本論文目的是分離裂解性肺炎克雷伯菌噬菌體并分析生物學(xué)特性，為噬菌體用于耐藥性肺炎克雷伯菌的感染提供初步的前期工作。 本項研究以25株肺炎克雷伯菌臨床分離株為宿主菌，從醫(yī)院污水中分離出4株裂解性肺炎克雷伯菌噬菌體(分別命名為φKp-lyy15、φKp-lyy17、φKp-lyy19和φKp-lyy22)。透射電鏡觀察顯示，4株噬菌體的形態(tài)學(xué)特征符合有尾病毒目(theCaudovirales)，其中噬菌體φKp-lyy15和φKp-lyy19為長尾病毒科(Siphoviridaefamily)噬菌體；噬菌體φKp-lyy17屬于足尾病毒科(Podoviridae family)噬菌體；而噬菌體φKp-lyy22則屬于滴狀病毒科(Guttaviridae family)噬菌體。通過生物學(xué)特性的分析發(fā)現(xiàn)，(1)噬菌體φKp-lyy22的潛伏期為15min、爆發(fā)期的時間近80min，爆發(fā)量為60PFU/cell。此外，φKp-lyy22僅能裂解3株肺炎克雷伯菌分離株（裂解率為12%），說明裂解譜較窄；(2)噬菌體φKp-lyy15的潛伏期為10min、爆發(fā)期的時間為30min，爆發(fā)量為65PFU/cell；(3) φKp-lyy15的基因組為dsDNA、含有EcoR V、Nde I和Bgl II的酶切位點；(4) φKp-lyy15的SDS-PAGE分析，可見3個主要蛋白條帶和8個次要蛋白條帶，其相對分子量在15～170kDa之間；(5)噬菌體φKp-lyy15可裂解8株肺炎克雷伯菌分離株（裂解率為32%），說明具有較寬的裂解譜；(6)穩(wěn)定性試驗顯示，噬菌體φKp-lyy15在pH4～10的范圍內(nèi)以及在50℃～60℃的條件下仍可有效裂解宿主菌。 綜上所述，1.本項工作分離的4株肺炎克雷伯菌噬菌體為裂解性噬菌體，噬菌體φKp-lyy15和φKp-lyy19屬有尾病毒目、長尾病毒科噬菌體；噬菌體φKp-lyy17和φKp-lyy22則分別屬于足尾病毒科和滴狀病毒科噬菌體。2.通過生物學(xué)特性的分析發(fā)現(xiàn)，噬菌體φKp-lyy15是潛伏期短、裂解性強(qiáng)、裂解譜寬以及對pH和溫度具有耐受性的裂解性噬菌體，為進(jìn)步研究利用噬菌體治療耐藥性肺炎克雷伯菌感染提供了可能。
【關(guān)鍵詞】：噬菌體 噬菌體治療 肺炎克雷伯菌 多重耐藥性
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R378
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 中英文縮略詞對照11-12
• 第1章 文獻(xiàn)回顧12-18
• 1.1 肺炎克雷伯菌所致的感染和耐藥監(jiān)測近況12-13
• 1.2 噬菌體療法及其針對肺炎克雷伯菌感染的治療13-16
• 1.3 噬菌體的應(yīng)用16-18
• 第2章 肺炎克雷伯菌噬菌體的分離鑒定及生物學(xué)特性研究18-41
• 2.1 材料18-21
• 2.1.1 菌株18-19
• 2.1.2 主要試劑19-20
• 2.1.3 主要儀器20-21
• 2.2 方法21-26
• 2.2.1 宿主菌的準(zhǔn)備21
• 2.2.2 污水樣本處理21
• 2.2.3 噬菌體的分離21
• 2.2.4 噬菌體的初步純化和滴度測定21-22
• 2.2.5 宿主菌的裂解譜試驗22
• 2.2.6 噬菌體透射電鏡觀察22
• 2.2.7 噬菌體核酸提取22-23
• 2.2.8 噬菌體核酸酶切分析23
• 2.2.9 細(xì)菌總數(shù)測定實驗23
• 2.2.10 噬菌體最佳感染復(fù)數(shù)( Multiplicity of infection，MOI) 的測定23-24
• 2.2.11 噬菌體吸收率實驗24
• 2.2.12 噬菌體一步生長曲線的測定24-25
• 2.2.13 噬菌體熱穩(wěn)定性試驗25
• 2.2.14 噬菌體 pH 穩(wěn)定性試驗25
• 2.2.15 噬菌體蛋白 SDS-PAGE 分析25-26
• 2.3 結(jié)果26-38
• 2.3.1 肺炎克雷伯菌的形態(tài)26-27
• 2.3.2 噬菌體的分離27-28
• 2.3.3 噬菌體的初步純化28
• 2.3.4 噬菌體裂解譜試驗28-30
• 2.3.5 噬菌體電鏡觀察結(jié)果30-31
• 2.3.6 噬菌體基因組的酶切電泳31-32
• 2.3.7 噬菌體φKp-lyy15 的 MOI 測定32-33
• 2.3.8 噬菌體的吸收率實驗33-34
• 2.3.9 噬菌體的一步生長曲線實驗34-35
• 2.3.10 噬菌體的熱穩(wěn)定性35-36
• 2.3.11 噬菌體的 pH 穩(wěn)定性36-37
• 2.3.12 噬菌體蛋白的 SDS-PAGE 電泳37-38
• 2.4 討論38-41
• 第3章 結(jié)論41-42
• 參考文獻(xiàn)42-49
• 作者簡介49-50
• 在校期間科研成果50-51
• 致謝51

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前9條

1 張雪云;褚云卓;歐陽金鳴;陳佰義;;耐碳青霉烯類鮑曼不動桿菌耐藥機(jī)制研究[J];中國感染與化療雜志;2007年06期

2 王公德;參與金屬腐蝕的微生物及其控制[J];生物學(xué)通報;1996年02期

3 李繼霞;公衍文;;多重耐藥菌醫(yī)院感染狀況分析[J];檢驗醫(yī)學(xué);2013年09期

4 劉子芝;趙勇;劉紀(jì)艷;楊建華;尹望中;王穎;趙晶;周永q

本文編號：333801