目的本課題以為研究表皮干細胞線粒體為新的切入點,通過體外構(gòu)建miRNA分子表達載體,體外篩選干擾效率最高的重組慢病毒,通過卵周隙顯微注射這一病毒建立基因沉默小鼠,并對小鼠進行檢測,得到目標基因沉默小鼠模型,研究TFAM/POLG基因沉默下,表皮干細胞生物行為行為變化情況,為深入探討ESC的增殖分化機制,提供新的理論依據(jù)。方法1、第一部分通過網(wǎng)站在線設計軟件（ http://katahdin.cshl.org:9331/ homepage/portal/Scripts/main2.pl）,針對小鼠目標基因TFAM和POLG分別設計了三個條miR-shRNA分子序列;并通過DNA重組技術,以慢病毒載體FUGW為骨架,構(gòu)建出miR30-based shRNA的重組慢病毒表達載體,并通過酶切鑒定與測序檢測驗證重組序列的準確性。通過“三質(zhì)粒包裝系統(tǒng)”,利用293FT細胞分別對上述重組慢病毒載體進行病毒包裝,濃縮病毒懸液,制備出大于109的高滴度的重組慢病毒液;利用小鼠成纖維細胞進行病毒干擾效率的檢測。2、第二部分使用上述篩選出來的慢病毒載體并結(jié)合顯微注射技術,完成了對卵周隙的病毒載體顯微注射,培... 

【文章來源】：錦州醫(yī)科大學遼寧省

【文章頁數(shù)】：52 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

AFUGW質(zhì)粒

包裝質(zhì)粒psPAX2

包膜質(zhì)粒PMD2.G


本文編號：3335421