目的本課題以為研究表皮干細(xì)胞線粒體為新的切入點(diǎn),通過(guò)體外構(gòu)建miRNA分子表達(dá)載體,體外篩選干擾效率最高的重組慢病毒,通過(guò)卵周隙顯微注射這一病毒建立基因沉默小鼠,并對(duì)小鼠進(jìn)行檢測(cè),得到目標(biāo)基因沉默小鼠模型,研究TFAM/POLG基因沉默下,表皮干細(xì)胞生物行為行為變化情況,為深入探討ESC的增殖分化機(jī)制,提供新的理論依據(jù)。方法1、第一部分通過(guò)網(wǎng)站在線設(shè)計(jì)軟件（ http://katahdin.cshl.org:9331/ homepage/portal/Scripts/main2.pl）,針對(duì)小鼠目標(biāo)基因TFAM和POLG分別設(shè)計(jì)了三個(gè)條miR-shRNA分子序列;并通過(guò)DNA重組技術(shù),以慢病毒載體FUGW為骨架,構(gòu)建出miR30-based shRNA的重組慢病毒表達(dá)載體,并通過(guò)酶切鑒定與測(cè)序檢測(cè)驗(yàn)證重組序列的準(zhǔn)確性。通過(guò)“三質(zhì)粒包裝系統(tǒng)”,利用293FT細(xì)胞分別對(duì)上述重組慢病毒載體進(jìn)行病毒包裝,濃縮病毒懸液,制備出大于109的高滴度的重組慢病毒液;利用小鼠成纖維細(xì)胞進(jìn)行病毒干擾效率的檢測(cè)。2、第二部分使用上述篩選出來(lái)的慢病毒載體并結(jié)合顯微注射技術(shù),完成了對(duì)卵周隙的病毒載體顯微注射,培... 

【文章來(lái)源】：錦州醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁(yè)數(shù)】：52 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

AFUGW質(zhì)粒

包裝質(zhì)粒psPAX2

包膜質(zhì)粒PMD2.G


本文編號(hào)：3335421