痢疾是由志賀菌引起的以發(fā)熱、腹瀉、血便和腹痛為主要癥狀的菌痢,具有高傳染性、高發(fā)病率和高死亡率等嚴(yán)重危害,尤其是在5歲以下兒童中更為突出。痢疾主要由福氏志賀菌和宋內(nèi)志賀菌引起,近年來我國宋內(nèi)志賀菌感染率正不斷攀升,耐藥情況也日趨嚴(yán)峻。疫苗接種被認(rèn)為是預(yù)防和控制傳染病最經(jīng)濟(jì)有效的手段。細(xì)菌表面多糖（如O抗原多糖和莢膜多糖）能夠激發(fā)機體產(chǎn)生保護(hù)性抗體,然而,多糖抗原不能產(chǎn)生長久的保護(hù)效果,并且大多對2歲以下兒童無效。將多糖連接到適當(dāng)?shù)牡孜锏鞍字苽涑啥嗵墙Y(jié)合疫苗,使其由T細(xì)胞非依賴抗原轉(zhuǎn)變?yōu)門細(xì)胞依賴抗原,則彌補了多糖抗原用作疫苗的不足。多糖結(jié)合疫苗的發(fā)展和應(yīng)用成就有目共睹,被稱為最成功的疫苗之一。現(xiàn)有的多糖蛋白結(jié)合疫苗都是通過化學(xué)合成方法制備,存在多種缺陷。如今,除了化學(xué)合成法生產(chǎn)多糖蛋白結(jié)合疫苗外,還有一種新興的方法——生物合成法。本研究通過應(yīng)用生物合成法“一站式”制備宋內(nèi)志賀菌多糖蛋白結(jié)合疫苗,并對其理化、生物學(xué)特性及保護(hù)性進(jìn)行評價。首先我們利用基因工程手段敲除宋內(nèi)菌S7株的O-抗原連接酶基因（waaL）構(gòu)建S7 waaL表達(dá)菌株,之后將糖基化系統(tǒng)質(zhì)粒(pET28a-PglL-CTB<... 

【文章來源】：中國食品藥品檢定研究院北京市

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

志賀菌入侵過程

碩士研究生學(xué)位論文·中國食品藥品檢定研究院·2015 級素 A（PEA)、霍亂毒素(CT)和霍亂毒素 B 亞單位(CTB)等等[33]，我國的結(jié)合疫苗大多是以 TT 為載體蛋白，國外常用的載體蛋白有 TT、DT、CRM197及 OMP 等[34]。隨著多糖疫苗的不斷發(fā)展，多糖結(jié)合疫苗的研究也不斷推進(jìn)。到 2011 年，15價肺炎多糖結(jié)合疫苗已經(jīng)研制成功。多糖結(jié)合疫苗獲得社會效益的同時也獲得了巨大的經(jīng)濟(jì)效益。圖 1.2 是多糖疫苗和多糖結(jié)合疫苗發(fā)展的歷史時間表。

圖 1.2 多糖疫苗和多糖結(jié)合疫苗及其發(fā)展歷史時間表[35]3 宋內(nèi)菌多糖抗原3.1 志賀菌常見抗原物質(zhì)尋找合適的抗原，是研究良好疫苗的前提。從以往的研究來看，大部分細(xì)菌抗原一般傾向于膜蛋白和鞭毛蛋白。經(jīng)過大量對志賀菌常見抗原的研究取得了一些成果：（1）脂多糖（LPS）/OPS：LPS 是革蘭氏陰性細(xì)菌的內(nèi)毒素，存在于細(xì)菌外膜由脂質(zhì) A、核心多糖和 OPS 三部分組成，如圖 1.3 所示。OPS 是由多個糖單位重復(fù)串聯(lián)而成，是血清分型依據(jù)之一。多項研究已經(jīng)證明 OPS[20, 22]和 LPS[36, 37]是良好的抗原物質(zhì)。（2）志賀菌外膜囊泡（OMVs）：OMVs 是志賀菌分泌的一種囊泡結(jié)構(gòu)由 LPS、蛋白顆粒和核酸等物質(zhì)構(gòu)成[38, 39]。（3）Invaplex：是從志賀菌裂解液中通過水萃取和離子交換層析得到的含有 LPS 和 T3SS 蛋白的復(fù)合物[40, 41]。（4）OmpA是一個從福氏志賀菌中通過離子交換層析法純化得到的 34 kDa

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3325460