單純皰疹病毒I型（herpes simplex virus I,HSV-1）作為引起人類皰疹性疾病的主要病原體,在人類中廣泛傳播并頻繁地從潛伏狀態(tài)再活化從而引起疾病,在不同年齡段人群中均具有較高的感染率。HSV-1在人群中通常引起口唇皰疹、角膜皰疹、皰疹性腦炎以及生殖器皰疹等疾病。長期以來,針對該病原的預(yù)防和治療的相關(guān)研究不斷深入,已經(jīng)使得部分藥物如阿昔洛韋及其衍生物等在臨床中廣泛應(yīng)用。但是,目前還沒有有效的疫苗用來預(yù)防單純皰疹病毒感染。減毒活疫苗一直以來被視為能抵抗病毒病原的有效選擇,主要是因?yàn)闇p毒株能誘發(fā)較好的免疫保護(hù)效應(yīng)。在前期的工作中,本科室研究人員利用CRISPR/Cas9系統(tǒng)分別構(gòu)建了單純皰疹病毒I型（Herpes simplex virus,HSV-1）基因修飾減毒株M3和M5,M3減毒株是通過對HSV-1毒力因子UL7、免疫調(diào)控相關(guān)蛋白Vhs（UL41）和潛伏相關(guān)轉(zhuǎn)錄本LAT基因進(jìn)行順次缺失突變而獲得的。在M3的基礎(chǔ)上,我們繼續(xù)完成了 US3和US5基因的缺失突變修飾,獲得了減毒株M5。US3和US5基因均在細(xì)胞毒性T細(xì)胞（Cytotoxic T cell,CTL）誘導(dǎo)... 

【文章來源】：昆明醫(yī)科大學(xué)云南省

【文章頁數(shù)】：79 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１?ＨＳＶ－１病毒顆粒的基本結(jié)構(gòu)模式（ａ）和基因組結(jié)構(gòu)（ｂ）

ＵＳ３和ＵＳ５基因的缺失修飾可以在病毒增殖過程中穩(wěn)定傳代，同時(shí)，??針對突變株Ｍ４和Ｍ５所做的體外增殖分析結(jié)果也表明，在人二倍體細(xì)胞中，與??野生型毒株相比，兩個(gè)毒株均呈現(xiàn)出與Ｍ３類似的低增殖特性（圖７）。這些結(jié)??果也提示ＵＳ３和ＵＳ５基因的突變并不會影響ＨＳＶ１的增殖能力。??Ｍ０Ｉ＝０＿１??？?ＷＴ??８，?＋?Ｍ３??〇?°?０＾?＋?Ｍ４??Ｑ?６－?Ｍ５??２－??０?１?Ｉ?Ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ??８?１６?２４?３２?４０?４８??Ｈｏｕｒｓ?ｐｏｓｔ?ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ??圖７減毒株與野生型毒株在細(xì)胞水平的增殖速率比較??２．２?ＨＳＶ－１突變株Ｍ４和Ｍ５在體外和抑制細(xì)胞凋亡的情況??大量研究已經(jīng)表明，ＵＳ３和ＵＳ５基因主要通過抑制ＣＴＬ誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡效??應(yīng)而參與病毒的免疫逃逸過程。然而，ＨＳＶ－１編碼多種蛋白調(diào)控抑制細(xì)胞凋亡作??用，單一敲除某個(gè)基因雖然可以在一定程度上解除細(xì)胞凋亡抑制作用，但是這種??４９??

不會產(chǎn)生任何明顯可見的臨床癥狀，也不會導(dǎo)致小鼠出現(xiàn)死亡情況。??Ｍ５免疫小鼠免疫接種的第１到第１２天，未出現(xiàn)任何異常，其體重仍正常均衡??增加（圖８Ａ），而動物的生存率和臨床癥狀可直接反應(yīng)出ＨＳＶ－１毒株的毒力強(qiáng)??弱以及安全性的高低。這個(gè)結(jié)果初步證明了?Ｍ５具有減毒特性，而且不會威脅動??物的生存安全。??Ｏ?Ｑ??２５．?令Ｍ５免疫組??＋?Ｍ５??－ｅ－?ＰＢＳｍ?＋?ＰＢＳ??２０－?８０－??ｅ?〇?Ｂ?露?Ｍ??哆?１〇＿?４０－??５－?２０－??〇？?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?〇－?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ??０２４６８?１０?１２?０２４６８?１０??免疫天數(shù)?免疫天數(shù)??圖８?Ｍ５和ＰＢＳ免疫后小鼠的體重（Ａ）變化及生存率（Ｂ）??２．４?ＨＳＶ－１突變株Ｍ５免疫的小鼠感染野生型毒株后的臨床癥狀觀察??在Ｍ５通過滴鼻方式免疫小鼠后，分別在免疫后的第２８天和第５６天對試驗(yàn)??５０??


本文編號：3311405