目的:研究過(guò)表達(dá)miR-155對(duì)BMP9誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞C3H10T1/2成骨分化的影響。方法:（1）用重組腺病毒Ad-BMP9（BMP9）誘導(dǎo)C3H10T1/2細(xì)胞成骨分化,定量PCR（qPCR）檢測(cè)miR-155的表達(dá),RT-PCR檢測(cè)Runx2和ALP的表達(dá)。（2）miR-155和BMP9共同處理C3H10T1/2細(xì)胞,qPCR檢測(cè)miR-155的表達(dá),ALP活性和染色檢測(cè)早期成骨能力。（3）miR-155和BMP9共同處理C3H10T1/2細(xì)胞,誘導(dǎo)分化14d茜素紅S染色檢測(cè)晚期成骨能力。（4）miR-155和BMP9共同處理C3H10T1/2細(xì)胞,qPCR檢測(cè)成骨分化相關(guān)基因Runx2、OSX、COL1A1、ALP、OCN和OPN的表達(dá)。（5）miR-155和BMP9共同處理C3H10T1/2細(xì)胞,Western blot檢測(cè)p-Smad1/5/8、OCN和OPN蛋白水平的表達(dá)。（6）qPCR和Western blot分別檢測(cè)HIF1α和VEGF的mRNA表達(dá)水平和蛋白質(zhì)表達(dá)水平。（7）應(yīng)用熒光素酶報(bào)告基因?qū)iR-155的靶基因進(jìn)行篩選和驗(yàn)證。結(jié)果:在BMP9誘導(dǎo)C3H10... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)生物工程雜志. 2017,37(05)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：10 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 細(xì)胞和重組腺病毒來(lái)源
        1.1.2 試劑來(lái)源
        1.1.3 轉(zhuǎn)染所用寡核苷酸序列
    1.2 方法
        1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        1.2.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        1.2.3 ALP染色及活性測(cè)定
        1.2.4 茜素紅S染色
        1.2.5 PCR
        1.2.6 Western blot
        1.2.7 熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)
    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 在BMP9誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞C3H10T1/2細(xì)胞成骨分化過(guò)程中miR-155的表達(dá)變化
    2.2 過(guò)表達(dá)miR-155減弱BMP9誘導(dǎo)的C3H10T1/2細(xì)胞早期成骨分化
    2.3 過(guò)表達(dá)miR-155減弱BMP9誘導(dǎo)的C3H10T1/2細(xì)胞晚期成骨分化
    2.4 過(guò)表達(dá)miR-155降低BMP9誘導(dǎo)的成骨相關(guān)因子的表達(dá)
    2.5 過(guò)表達(dá)miR-155抑制BMP信號(hào)通路
    2.6 過(guò)表達(dá)miR-155抑制HIF1α和VEGF的表達(dá)
    2.7 miR-155直接靶向HIF1α
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]MicroRNAs in Common Human Diseases[J]. Kris V.Kowdley.  Genomics, Proteomics & Bioinformatics. 2012(05)



本文編號(hào)：3273051