本課題研究包括兩部分內(nèi)容,第一部分:下調(diào)MAPK4的表達(dá)對CD4⁺T細(xì)胞體外活化及功能的影響。第二部分:MAPK4/MK5通路對CD4⁺T細(xì)胞體外活化及功能的影響。分述如下:目的:第一部分:利用MAPK4 RNAi干擾載體,結(jié)合MAPK4基因敲除小鼠模型,通過磁珠分選技術(shù)、流式細(xì)胞技術(shù)、CCK8檢測法、實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)以及分子克隆技術(shù),觀察下調(diào)MAPK4的表達(dá)對CD4⁺T細(xì)胞體外活化及功能的影響。第二部分:利用RNAi干擾技術(shù),結(jié)合磁珠分選技術(shù)、流式細(xì)胞技術(shù)、CCK8檢測法、實(shí)時(shí)熒光定量PCR以及Western Blot實(shí)驗(yàn)技術(shù),探討MAPK4/MK5通路對CD4⁺T細(xì)胞體外活化及功能的影響。方法:第一部分1.利用RNAi干擾技術(shù)原理,構(gòu)建MAPK4 RNAi真核表達(dá)載體（p-MAPK4RNAi）和對照載體（p-Cont）。通過基因測序驗(yàn)證,將構(gòu)建成功的載體瞬時(shí)轉(zhuǎn)染入磁珠分選（magnetic cell sorting,MACS）技術(shù)獲得的野生型小鼠脾臟CD4⁺CD62L... 

【文章來源】：遵義醫(yī)科大學(xué)貴州省

【文章頁數(shù)】：90 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

CD4+T細(xì)胞及其功能亞群Figure1.CD4+Tcellsandfunctionalsubgroups

圖 2. CD4+T 細(xì)胞功能的相關(guān)信號傳導(dǎo)途徑Figure 2. The function of CD4+T cells and related signaling pathway 信號通路概述活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase, MAPK）是細(xì)胞氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，在胞漿中激活后對細(xì)胞的增殖、分化和控作用[38-41]。哺乳動物細(xì)胞中，MAPK 家族主要包括：細(xì)胞外/2（Extracelluar-regulated Kinase 1/2, ERK 1/2）、c-Jun 氨基酸-terminal kinase, JNK）/ 應(yīng)激活化蛋白激酶（stress-activatePK）、p38MAPK 和 ERK5 四個(gè)主要亞群，通過信號通路的級擴(kuò)大，最終對細(xì)胞的生物學(xué)功能發(fā)揮調(diào)控作用（圖 3）。其中，內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑被認(rèn)為是經(jīng)典 MAPK 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，它是

VEGFR2 信號通路軸被激活，導(dǎo)致下游效應(yīng)分子激活 transcription factor-2，ATF2）發(fā)揮調(diào)控作用[45]。類似的，R（Ras-related C3 botulinum toxin substrate，Rac）和細(xì)胞分裂nant Cell Division Cycle Protein 42，Cdc42）也可通過 nases）激酶激活 p38[46]。此外，p38MAPK 與 c-myc 基因表達(dá)as 介導(dǎo)的凋亡信號轉(zhuǎn)導(dǎo)密切相關(guān)，參與了細(xì)胞的凋亡過程[4示，MAPK 家族成員參與了 CD4+T 細(xì)胞的活化、增殖及相關(guān)umacher 等[52]報(bào)道，ERK3 蛋白磷酸化與 MK5 的協(xié)同作的活化過程中發(fā)揮重要作用。類似的，Samelson 等[53]研究信號生化效應(yīng)介導(dǎo)了 CD4+T 細(xì)胞的增殖、分化等生物學(xué)功 信號通路與 T 細(xì)胞的活化、增殖等生物學(xué)功能密切相關(guān)，然于更深一步的研究探討。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3273570