本文關(guān)鍵詞：SIL-36R的鑒定、克隆及SIL-36R與IL-36Ra抑制IL-36誘導(dǎo)的REG3A的功能研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：白細(xì)胞介素36(IL-36)是重要的免疫調(diào)節(jié)因子,包括IL-36α IL-36β和IL-36γ三個(gè)亞型。IL-36通過結(jié)合并激活其受體IL-36R啟動(dòng)下游促炎癥信號(hào)通路誘導(dǎo)機(jī)體的炎癥應(yīng)答,參與機(jī)體的固有免疫調(diào)節(jié)和宿主防御。IL-36R是IL-1R家族的成員,該家族的信號(hào)通路通常有兩種負(fù)向調(diào)節(jié)機(jī)制,一種是受體拮抗蛋白與配體競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合受體,另一種是胞外的可溶性受體或細(xì)胞膜上的誘餌受體與主要受體競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合配體,從而抑制信號(hào)通路。IL-36受體拮抗蛋白IL-36Ra可競(jìng)爭(zhēng)性地結(jié)合IL-36R但不啟動(dòng)信號(hào)傳導(dǎo),發(fā)揮負(fù)向調(diào)節(jié)信號(hào)通路的功能,但是IL-36R的可溶性受體或誘騙受體形式至今未見報(bào)道。作為在皮膚組織中高表達(dá)的細(xì)胞因子,IL-36及IL-36Ra在皮膚炎癥調(diào)節(jié)中的生物學(xué)功能已被廣泛研究,然而它們?cè)谄つw傷口愈合中的具體作用還未被研究。本研究中,我們首先檢測(cè)了IL-36和IL-36Ra在小鼠皮膚傷口部位的表達(dá)情況,發(fā)現(xiàn)在皮膚傷口部位IL-36和IL-36Ra的表達(dá)均顯著上調(diào),其中IL-36γ表達(dá)上調(diào)的時(shí)間最早。同時(shí)也檢測(cè)了皮膚傷口中RegⅢγ的表達(dá)情況,發(fā)現(xiàn)在野生型小鼠皮膚傷口中,RegⅢγ的表達(dá)在傷口愈合的前期上升,在后期下降；而在IL-36Ra缺失的小鼠皮膚傷口中,RegⅢγ的表達(dá)在傷口愈合的整個(gè)過程中持續(xù)性上調(diào)。這些結(jié)果表明皮膚中IL-36和IL-36Ra與RegⅢγ的表達(dá)及皮膚傷口愈合之間存在相關(guān)性。為了確定IL-36γ是否誘導(dǎo)REG3A的表達(dá),我克隆、表達(dá)并純化了人的IL-36γ和IL-36Ra重組蛋白。在體外用IL-36γ刺激皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)IL-36γ能夠誘導(dǎo)角質(zhì)形成細(xì)胞中REG3A的表達(dá),并促進(jìn)傷口愈合；當(dāng)IL-36Ra和IL-36γ共刺激角質(zhì)形成細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)IL-36Ra抑制IL-36γ誘導(dǎo)的REG3A的表達(dá)。這些結(jié)果證明了IL-36γ通過誘導(dǎo)REG3A的表達(dá)促進(jìn)傷口愈合,而IL-36Ra則對(duì)這一過程進(jìn)行負(fù)調(diào)控。此外,我從人皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞中首次鑒定并克隆了一種截短形式的IL-36R剪接變體一—sIL-36R,當(dāng)在角質(zhì)形成細(xì)胞中超表達(dá)sIL-36R后,發(fā)現(xiàn)IL-36γ不再能夠誘導(dǎo)REG3A的表達(dá)。表明sIL-36R具有抑制IL-36γ誘導(dǎo)的REG3A的表達(dá)并抑制IL-36γ促進(jìn)的傷口愈合的功能�？傊�,我們的研究證明了IL-36Ra在皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞表達(dá)REG3A及傷口愈合調(diào)控中的作用,首次鑒定克隆了新的受體sIL-36R并對(duì)其在皮膚傷口愈合中的功能進(jìn)行了初步研究。我們的研究為臨床治療皮膚傷口不愈合提供了新的潛在的治療靶點(diǎn),我們的發(fā)現(xiàn)有望填補(bǔ)IL-36信號(hào)通路中沒有胞外可溶性受體這一研究空白。
【關(guān)鍵詞】：IL-36 IL-36Ra sIL-36R REG3A 傷口愈合
【學(xué)位授予單位】：華東師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R392
【目錄】：

• 摘要6-8
• ABSTRACT8-12
• 第一章 綜述12-30
• 1 IL-1家族及其受體概述12-15
• 2 IL-3615-21
• 2.1 IL-36的發(fā)現(xiàn)15-16
• 2.2 IL-36的來源16
• 2.3 IL-36的結(jié)構(gòu)16
• 2.4 IL-36的生物學(xué)功能16-17
• 2.5 IL-36與炎癥性疾病17-21
• 3 IL-36Ra21-25
• 3.1 IL-36Ra的發(fā)現(xiàn)21-22
• 3.2 IL-36Ra的來源22
• 3.3 IL-36Ra的結(jié)構(gòu)22-23
• 3.4 IL-36Ra的生物學(xué)功能23
• 3.5 IL-36Ra與銀屑病23-25
• 4 IL-36R25-29
• 4.1 IL-36R的發(fā)現(xiàn)25-26
• 4.2 IL-36R的來源26
• 4.3 IL-36R的結(jié)構(gòu)26-27
• 4.4 IL-36R信號(hào)通路27-28
• 4.5 IL-36R及其信號(hào)通路的生物學(xué)功能28-29
• 5 總結(jié)與展望29-30
• 第二章 sIL-36R的鑒定、克隆及sIL-36R與IL-36Ra抑制IL-36誘導(dǎo)的REG3A的功能研究30-75
• 1 引言30-32
• 2 實(shí)驗(yàn)材料32-38
• 2.1 實(shí)驗(yàn)試劑32-34
• 2.2 實(shí)驗(yàn)耗材34
• 2.3 實(shí)驗(yàn)儀器34-35
• 2.4 細(xì)胞株35
• 2.5 菌株35
• 2.6 質(zhì)粒35-36
• 2.7 引物36-37
• 2.8 抗體37
• 2.9 相關(guān)計(jì)算機(jī)軟件37
• 2.10 數(shù)據(jù)分析37-38
• 3 實(shí)驗(yàn)方法38-51
• 3.1 細(xì)菌的培養(yǎng)與保存38
• 3.2 質(zhì)粒提取38
• 3.3 基因克隆38-42
• 3.4 蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)與純化42-44
• 3.5 細(xì)胞培養(yǎng)44
• 3.6 細(xì)胞總RNA提取與反轉(zhuǎn)錄44-45
• 3.7 慢病毒質(zhì)粒構(gòu)建、包裝與感染45-48
• 3.8 細(xì)胞轉(zhuǎn)染48-49
• 3.9 細(xì)胞總蛋白提取與免疫印跡49-51
• 4 結(jié)果與分析51-71
• 4.1 IL-36γ激活I(lǐng)L-36R誘導(dǎo)REG3A的表達(dá)51-60
• 4.2 IL-36Ra拮抗IL-36γ誘導(dǎo)的REG3A的表達(dá)60-66
• 4.3 sIL-36R抑制IL-36γ誘導(dǎo)的REG3A的表達(dá)66-71
• 5 總結(jié)與討論71-75
• 參考文獻(xiàn)75-82
• 附錄Ⅰ 縮略詞表82-84
• 附錄Ⅱ 試劑配制84-86
• 致謝86

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