發(fā)布時(shí)間：2017-04-18 12:16

  本文關(guān)鍵詞：三種鼠原位移植性肝癌模型構(gòu)建與應(yīng)用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景原發(fā)性肝細(xì)胞癌(Primary Hepatocellular Carcinoma, PHC)是指發(fā)生在人體肝細(xì)胞或肝內(nèi)膽管上等細(xì)胞的惡性腫瘤性疾病,是我國(guó)常見(jiàn)惡性腫瘤之一。我國(guó)的肝癌患病率及病死率均為世界第一位,術(shù)后極容易復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移,而且化療耐藥,5年存活率較低,因此需要深入研究肝癌的發(fā)病機(jī)理,探索新的治療方法。許多人體實(shí)驗(yàn)由于倫理學(xué)的限制,導(dǎo)致許多藥物試驗(yàn)方法不可應(yīng)用于人。所以建立符合臨床肝癌發(fā)生與發(fā)展特點(diǎn)和疾病變化規(guī)律的動(dòng)物模型是所必需的。肝癌動(dòng)物模型主要分為誘導(dǎo)性肝癌模型和移植肝癌兩大類(lèi)。由于肝癌誘癌建模的時(shí)間長(zhǎng),單純靶向成肝癌的成模率有待提高,均影響肝癌誘癌動(dòng)物模型的應(yīng)用,因此移植性肝癌模型就成為重要的研究對(duì)象。目前,人肝癌-鼠模型是肝癌研究應(yīng)用最廣泛的動(dòng)物模型,其中常見(jiàn)的模型是人類(lèi)肝癌細(xì)胞系或組織塊接種于裸鼠、嚴(yán)重聯(lián)合免疫缺陷鼠(SCID)等免疫功能缺陷小鼠,解決許多肝癌復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移和治療機(jī)制等基礎(chǔ)研究的問(wèn)題,但此類(lèi)模型特點(diǎn)是免疫缺陷,只是將小鼠作為肝癌研究的“反應(yīng)器”,缺乏免疫系統(tǒng)對(duì)肝癌的影響因素。因此,本研究著重關(guān)注和構(gòu)建不同免疫狀況大、小鼠移植性肝癌模型,以肝癌復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的常見(jiàn)途徑,以鼠源的Walker-256細(xì)胞系與人源HepG2肝癌細(xì)胞系為細(xì)胞來(lái)源,通過(guò)肝葉注射和門(mén)靜脈注射,建立模擬肝癌轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)的大、小鼠原位移植性肝癌模型,以此模型盡量模擬臨床肝癌的惡性生物學(xué)行為特點(diǎn),并將其中大鼠模型應(yīng)用于臨床射頻消融的實(shí)驗(yàn)性治療和療效判定研究。此外,鼠源的Walker-256細(xì)胞系還可模擬繼發(fā)的轉(zhuǎn)移性肝癌的臨床發(fā)生過(guò)程。以此研究為肝癌的轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)以及繼發(fā)的轉(zhuǎn)移性肝癌的發(fā)生機(jī)制和干預(yù)治療提供實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型。目的：正常免疫和免疫抑制劑干預(yù)狀態(tài)下,構(gòu)建三種鼠原位移植性肝癌模型,為轉(zhuǎn)移性和復(fù)發(fā)性肝癌提供實(shí)驗(yàn)研究的動(dòng)物模型,并嘗試將大鼠模型應(yīng)用于臨床射頻消融實(shí)驗(yàn)性治療和療效判定研究。方法：選取鼠源Walker-256細(xì)胞系與人源HepG2肝癌細(xì)胞系,分別針對(duì)正常免疫狀態(tài)大鼠和肝移植后“三聯(lián)免疫抑制方案”免疫抑制小鼠,采用肝葉直接注射法和肝內(nèi)門(mén)靜脈注射法,建立三種原位移植性鼠肝癌模型,并形成以下分組：①門(mén)靜脈-Walker-256組：門(mén)靜脈注射Walker-256-鼠原位移植性肝癌模型,SD大鼠30只；②肝葉-Walker-256組：肝葉注射Walker-256鼠原位移植性肝癌模型,SD大鼠30只；③門(mén)靜脈-HepG2組：門(mén)靜脈注射人HepG2肝癌細(xì)胞-免疫抑制Balb/c小鼠原位移植性肝癌模型,小鼠15只,三聯(lián)免疫抑制方案為甲基強(qiáng)的松龍、他克莫司和嗎替麥考酚酯。肝癌鼠模型觀察指標(biāo)為：①動(dòng)物一般情況與成瘤率、腫瘤大小、肝臟及其鄰近臟器浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移情況；②病灶組織HE染色光鏡觀察；③大鼠模型高頻超聲超影像學(xué)觀察：；④動(dòng)態(tài)觀察小鼠模型體重、白細(xì)胞計(jì)數(shù)與分類(lèi)。此外,大鼠原位移植性鼠肝癌模型還用于射頻消融治療的實(shí)驗(yàn)性研究,取射頻消融病灶與周?chē)M織,進(jìn)行以下檢測(cè)：①：HE染色光鏡觀；②細(xì)胞凋亡TUNEL染色。結(jié)果：三種方法均能成功構(gòu)建鼠原位移植性肝癌模型,成模時(shí)間在9-15天之間,成瘤率在14.3%～33.3%之間,其中高頻超聲檢測(cè)門(mén)靜脈-Walker-256組與肝葉-Walker-256組模型大鼠,可發(fā)現(xiàn)肝葉腫瘤,主要體為圓形或橢圓形的不規(guī)則低回聲團(tuán),內(nèi)部回聲不均勻。HE染色顯微鏡下觀為腫瘤細(xì)胞呈條索及團(tuán)塊狀排列,胞核大濃染,異型性明顯,胞質(zhì)量少,為轉(zhuǎn)移性肝癌的特點(diǎn)。大鼠肝癌模型射頻消融干預(yù)后,以進(jìn)針點(diǎn)為中心,遞次向外延伸區(qū)域鏡下可見(jiàn)明顯的壞死區(qū)、凋亡壞死混合區(qū)和凋亡為主區(qū)域,其中前兩區(qū)域有大量的炎性細(xì)胞侵潤(rùn),后兩區(qū)域可見(jiàn)有少量殘余的腫瘤細(xì)胞。在門(mén)靜脈-HepG2組小鼠原位移植肝癌模型,模型小鼠白細(xì)胞數(shù)為8.87±4.25%；中性粒細(xì)胞所占比例數(shù)值為66.78±14.49%,淋巴細(xì)胞所占比例數(shù)為18.36±11.07%,單核細(xì)胞9.45±7.00%,小鼠體重變化呈逐步下降趨勢(shì),與正常比較有明顯差距。病理取材瘤體大小(直徑)為3.0mm。光鏡下病理學(xué)觀察為,細(xì)胞排列紊亂,細(xì)胞核較大分裂象增多,成深染,核仁明顯,異型性高,胞質(zhì)少且染色較淺。結(jié)論：三種原位移植性肝癌模型均成功構(gòu)建,可基本模擬血行轉(zhuǎn)移和種植轉(zhuǎn)移的轉(zhuǎn)移性肝癌和肝癌復(fù)發(fā),其中大鼠原位移植肝癌模型可用于射頻治療實(shí)驗(yàn)性研究。
【關(guān)鍵詞】：鼠 walker-256 HepG2 肝癌 射頻消融
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R735.7;R-332
【目錄】：

• 個(gè)人簡(jiǎn)歷3-5
• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-12
• 前言12-14
• 第一部分 WALKER-256大鼠原位移植性肝癌模型的建立及射頻消融治療14-26
• 1.材料與方法14-21
• 2.分析及處理21
• 3.試驗(yàn)結(jié)果21-26
• 第二部分 門(mén)靜脈注射人HEPG2肝癌細(xì)胞-免疫抑制BALB/C小鼠原位移植性肝癌模型的構(gòu)建26-41
• 1.材料與方法26-33
• 2.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理33
• 4.實(shí)驗(yàn)結(jié)果33-37
• 5.討論37-41
• 參考文獻(xiàn)41-43
• 附錄 實(shí)驗(yàn)操作圖43-44
• 綜述 鼠移植肝癌模型的研究進(jìn)展44-63
• 參考文獻(xiàn)60-63
• 致謝63-65
• 中英文對(duì)照詞65-66
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文66-67

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

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  本文關(guān)鍵詞：三種鼠原位移植性肝癌模型構(gòu)建與應(yīng)用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：314871