本文關鍵詞：基質(zhì)硬度對臍帶間充質(zhì)干細胞增殖、粘附、分化的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：臍帶間充質(zhì)干細胞(UC-MSC)是存在于新生兒臍帶華通膠中的一種多功能干細胞,具有易于貼壁生長、來源豐富等優(yōu)點,因其強大的增殖能力、多向分化潛能、免疫抑制和體內(nèi)再生能力,已被廣泛應用于組織工程學研究及臨床治療。本文通過機械分離臍帶基質(zhì)(臍帶華通膠),采用酶消化和組織塊法,獲得大量新鮮的有核臍帶間充質(zhì)干細胞(UC-MCS)。經(jīng)過鑒定,這些細胞可穩(wěn)定傳代。通過流式細胞儀和免疫熒光染色分析其表面標記物,發(fā)現(xiàn)間充質(zhì)細胞陽性表達CD44,CD73,CD90和CD105,陰性表達CD34和CD45。當在分化培養(yǎng)基中培養(yǎng),它們可以分化成脂肪細胞和成骨細胞。目前的研究表明,化學、機械因素已被廣泛用于研究其對細胞的行為的影響。許多研究運用可控的物理因素刺激干細胞,研究對定向成骨的影響,這些研究表明物理刺激可以誘導定向分化成骨�，F(xiàn)在已被研究的物理因素包括流體力學因素、生物力學因素、光化學因素及電磁因素等,其中細胞外基質(zhì)因為其對細胞行為的影響最明顯、操作簡單、可控性強而廣泛被研究。不同文獻表明,生長在不同硬度的細胞外基質(zhì)上的間充質(zhì)干細胞呈現(xiàn)出不同的分化方向。然而,基質(zhì)硬度是否可以影響細胞增殖、粘附和鋪展等其他細胞行為,間充質(zhì)干細胞的這些生物學行為對細胞的分化是否有影響,還沒有被詳細的研究論證。本文采用原代分離培養(yǎng)獲得臍帶間充質(zhì)干細胞,將其培養(yǎng)在硬度可調(diào)的聚丙烯酰胺凝膠上,凝膠上涂有纖連蛋白。根據(jù)雙丙烯酰胺的濃度不同,得到水凝膠的楊氏模量為13-16kpa、35-38kpa、48-53kpa和62-68kpa。結果表明,由于基質(zhì)硬度的不同,細胞的增殖和粘附能力均有不同表現(xiàn),而細胞的鋪展能力則是在35-38kpa、48-53kpa最強。實時定量PCR結果表明軟基質(zhì)可促進成脂分化,表現(xiàn)為PPARγ、C/EBα表達增加。35-38kpa、48-53kpa上細胞趨向于成肌分化,表現(xiàn)為Desmin和MOYG表達增加。在高硬度的基質(zhì)上細胞趨向于成骨分化,表現(xiàn)為ALP、I型膠原、骨鈣素、Runx2基因的表達增加。所以,我們認為,在較軟的基質(zhì)上細胞易于增殖和粘附,并且細胞向成脂方向分化;而較硬的基質(zhì)會阻礙細胞的增殖和粘附,細胞向成骨方向分化。
【關鍵詞】：臍帶間充質(zhì)干細胞 基質(zhì)硬度 增殖 分化
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R329
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-8
• 英文縮略詞8-12
• 第1章 前言12-23
• 1.1 人類間充質(zhì)干細胞目前的趨勢和未來的預期12-16
• 1.1.1 間充質(zhì)干細胞的來源12
• 1.1.2 間充質(zhì)干細胞的分離及原代培養(yǎng)12-13
• 1.1.3 間充質(zhì)干細胞表面標記的表達13
• 1.1.4 間充質(zhì)干細胞長期在體外培養(yǎng)的能力13
• 1.1.5 間充質(zhì)干細胞的體外分化能力13-14
• 1.1.6 間充質(zhì)干細胞的歸巢及臨床醫(yī)用14-15
• 1.1.7 臍帶間充質(zhì)干細胞的特性及展望15-16
• 1.2 基質(zhì)硬度影響細胞的行為及功能16-23
• 1.2.1 對基質(zhì)硬度研究的起源16-17
• 1.2.2 生物材料的發(fā)展趨勢17-18
• 1.2.3 細胞外基質(zhì)硬度對不同細胞的影響的研究進展18
• 1.2.4 對基質(zhì)硬度研究的展望18-23
• 第2章 材料與方法23-33
• 2.1 材料23-24
• 2.1.1 主要儀器和設備23
• 2.1.2 主要試劑23-24
• 2.2 實驗方法24-33
• 2.2.1 臍帶間充質(zhì)干細胞的原代獲取24
• 2.2.2 臍帶間充質(zhì)干細胞的傳代24-25
• 2.2.3 臍帶間充質(zhì)干細胞的凍存25
• 2.2.4 臍帶間充質(zhì)干細胞的復蘇25
• 2.2.5 臍帶間充質(zhì)干細胞的生長25-26
• 2.2.6 臍帶間充質(zhì)干細胞的鑒定26-27
• 2.2.7 基質(zhì)膠的制作27-28
• 2.2.8 CCK8檢測細胞存活28
• 2.2.9 水凝膠上細胞的形態(tài)28
• 2.2.10 水凝膠上細胞的粘附情況28
• 2.2.11 水凝膠上細胞的增殖情況28-29
• 2.2.12 水凝膠上細胞的分化情況29-32
• 2.2.13 統(tǒng)計學分析32-33
• 第3章 實驗結果33-47
• 3.1 原代HUC-MSC獲得及傳代培養(yǎng)33
• 3.2 人臍帶間充質(zhì)干細胞的細胞生長33-34
• 3.2.1 細胞周期的檢測33-34
• 3.2.2 細胞生長曲線34
• 3.3 人臍帶間充質(zhì)干細胞的免疫表型特征34-36
• 3.4 臍帶間充質(zhì)干細胞的分化潛能36
• 3.5 基質(zhì)硬度的制作及測定36-38
• 3.6 水凝膠對細胞的毒性作用38
• 3.7 不同的基質(zhì)硬度上的臍帶間充質(zhì)干細胞形態(tài)38-40
• 3.8 不同的基質(zhì)硬度對臍帶間充質(zhì)干細胞粘附能力的影響40-41
• 3.9 不同的基質(zhì)硬度對臍帶間充質(zhì)干細胞增殖的影響41-44
• 3.10 不同的基質(zhì)硬度上的臍帶間充質(zhì)干細胞的分化44-47
• 3.10.1 臍帶間充質(zhì)干細胞成脂分化44-45
• 3.10.2 臍帶間充質(zhì)干細胞的成肌分化45
• 3.10.3 臍帶間充質(zhì)干細胞的成骨分化45-47
• 第4章 討論47-50
• 第5章 結果與結論50-51
• 5.1 結果50
• 5.2 結論50-51
• 第6章 展望51-52
• 參考文獻52-59
• 作者簡介及在學期間所取得的成果59-60
• 致謝60

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  本文關鍵詞：基質(zhì)硬度對臍帶間充質(zhì)干細胞增殖、粘附、分化的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：313352