發(fā)布時(shí)間：2021-03-31 09:27

　　目的應(yīng)用芯片技術(shù)和分子生物學(xué)技術(shù)研究在丙戊酸鈉（Valproate,VPA）誘導(dǎo)海馬神經(jīng)干細(xì)胞（Neural stem cells,NSCs）向神經(jīng)元分化過(guò)程中miR-29a-5p所起的作用。實(shí)驗(yàn)一:大鼠海馬神經(jīng)干細(xì)胞VPA處理后mRNAs和miRNAs差異表達(dá)譜的構(gòu)建方法（1）分離培養(yǎng)大鼠胚胎海馬NSCs,設(shè)置VPA濃度梯度0.3mM、0.6mM、1mM和3mM,用VPA和對(duì)照溶劑分別進(jìn)行處理,免疫熒光檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況。（2）運(yùn)用免疫熒光、蛋白質(zhì)免疫印跡（Western blot）和細(xì)胞流式技術(shù)檢測(cè)VPA在海馬NSCs中的組蛋白乙�；郊霸贜SCs增殖和分化中的作用。（3）利用實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)關(guān)鍵的神經(jīng)元特異分子—突觸蛋白1（Synapsin I,Syn1）和微管相關(guān)蛋白2（Microtubule-associated protein 2,Map2）,在VPA處理后的動(dòng)態(tài)表達(dá),選擇神經(jīng)元特異分子表達(dá)開(kāi)始顯著增加的時(shí)間點(diǎn)收取芯片樣本。（4）樣本送生物芯片公司,構(gòu)建mRNAs和miRNAs差異表達(dá)譜,得到差異倍數(shù)在1.5倍以上、P值小于0.05的mRNAs和miRNAs數(shù)據(jù)。（5）收... 

【文章來(lái)源】：南通大學(xué)江蘇省

【文章頁(yè)數(shù)】：100 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

鑒定大鼠海馬NSCsA：神經(jīng)球B：Nestin陽(yáng)性細(xì)胞C：Ki67陽(yáng)性細(xì)胞D：MAP2

理后 NSCs 凋亡情況optosis of NSCs after VPA treatment組蛋白乙�；降挠绊懚� VPA 處理后組蛋白乙�；绞欠癜l(fā)生變化，我們進(jìn)行檢測(cè)。免疫熒光顯示，分化 7d 后，與對(duì)照組相比，顯增加（圖 3A）。此外，Western blot 結(jié)果也顯示 VPA 明顯的上調(diào)（圖 3B、C），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P <0.00

4乙�；磉_(dá)變化 A：acH4陽(yáng)性細(xì)胞 B：H4和acH4的蛋白質(zhì)表達(dá) C： VPA 組中 acH4 蛋白水平上調(diào)，*** P <0.0013 Changes in expression of H4 acetylation A: acH4 positive cells B: The exnd acH4 protein C: Statistical analysis showed that the increasing level of acH4 Group, *** P <0.001PA 對(duì) NSCs 增殖的影響了探究 VPA 對(duì) NSCs 增殖的影響，本實(shí)驗(yàn)用細(xì)胞免疫熒光進(jìn)行檢l/LVPA 處理 NSCs 24h 后，EdU 增殖實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量與著減少（圖 4A、C）（P<0.001），同時(shí) Ki67 細(xì)胞免疫熒光顯示 VPA胞數(shù)量明顯減少（圖 4B、D）（P<0.01）。因此我們認(rèn)為 VPA 可抑。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]穹窿海馬傘切割后海馬內(nèi)NSCs的增殖和向神經(jīng)元的分化[J]. 鄒琳清,金國(guó)華,董傳明,秦建兵,田美玲,張新化,朱蕙霞.  蘇州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2007(05)



本文編號(hào)：3111202