主要組織相容性抗原復(fù)合體（MHC）是一種存在于脊椎動物中的由一個龐大的基因家族編碼的細(xì)胞表面分子,介導(dǎo)白細(xì)胞,也就是常說的免疫細(xì)胞與其它白細(xì)胞或體細(xì)胞間的相互作用,在機(jī)體細(xì)胞間識別和區(qū)分自已與異己中扮演重要角色。MHC分子作為表達(dá)于個體細(xì)胞表面的抗原遞呈結(jié)構(gòu),影響著不同來源抗原的T細(xì)胞反應(yīng)。因而,MHC在一定程度上決定了個體對于感染物抗原的免疫應(yīng)答,這其中也涉及到對疾病的易感性和自身免疫反應(yīng)的發(fā)生。在人類中,MHC又叫做人類白細(xì)胞抗原（HLA）。在細(xì)胞內(nèi),經(jīng)過抗原加工和蛋白酶體降解途徑產(chǎn)生的多肽作為T細(xì)胞表位,由MHCI類分子遞呈給細(xì)胞毒性T細(xì)胞（CTLs）。該過程在效應(yīng)細(xì)胞免疫中發(fā)揮著重要的作用。另一方面發(fā)生了各種翻譯后修飾（PTMs）的真核蛋白能夠產(chǎn)生一系列修飾的抗原,豐富了MHC相關(guān)多肽的類型,遞呈于細(xì)胞表面成為T細(xì)胞受體（TCR）識別的潛在目標(biāo)。已有研究表明,一些包含翻譯后修飾（如甲�；�、脫酰胺化、糖基化、乙�；�、磷酸化和半胱氨酸化）的多肽可以與各自的非修飾類似物被T細(xì)胞特異性地區(qū)分開。在某種情況下,發(fā)生于感染、炎癥、細(xì)胞轉(zhuǎn)化、凋亡和衰老中的翻譯后修飾往往帶來新的MHC相關(guān)新抗... 

【文章來源】：中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)安徽省 211工程院校 985工程院校

【文章頁數(shù)】：249 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 緒論（文獻(xiàn)綜述）
    1.1 引言
    1.2 MHC分子結(jié)構(gòu)免疫學(xué)概述
        1.2.1 MHC的概念
        1.2.2 MHC Ⅰ類分子相關(guān)抗原肽的加工呈遞
        1.2.3 MHC及相關(guān)分子的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)
        1.2.4 MHC分子結(jié)構(gòu)在T細(xì)胞免疫研究中的應(yīng)用
    1.3 翻譯后修飾抗原的MHC分子遞呈
        1.3.1 翻譯后修飾概述
        1.3.2 MHC相關(guān)抗原的翻譯后修飾
        1.3.3 翻譯后修飾在抗原識別及自身免疫中的影響
第二章 MHC Ⅰ類分子遞呈N端乙�；乖瓩C(jī)制研究
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        2.2.1 主要實(shí)驗(yàn)儀器
        2.2.2 主要商品試劑
        2.2.3 常用溶液及配制方法
        2.2.4 菌株和載體
        2.2.5 多肽合成
        2.2.6 引物設(shè)計與合成
*3901基因擴(kuò)增及亞克隆構(gòu)建">        2.2.7 HLA-B^*3901基因擴(kuò)增及亞克隆構(gòu)建
*3901和hβ₂m包涵體蛋白大量表達(dá)">        2.2.8 HLA-B^*3901和hβ₂m包涵體蛋白大量表達(dá)
        2.2.9 多肽與MHC Ⅰ類分子包涵體蛋白體外復(fù)性
        2.2.10 pMHC復(fù)合物的蛋白質(zhì)純化
        2.2.11 BCA protein assay kit檢測蛋白質(zhì)濃度
*3901復(fù)合物蛋白質(zhì)結(jié)晶">        2.2.12 pHLA-B^*3901復(fù)合物蛋白質(zhì)結(jié)晶
*3901復(fù)合物蛋白質(zhì)晶體X-射線衍射和數(shù)據(jù)收集">        2.2.13 pHLA-B^*3901復(fù)合物蛋白質(zhì)晶體X-射線衍射和數(shù)據(jù)收集
*3901復(fù)合物蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)解析、精修及分析">        2.2.14 pHLA-B^*3901復(fù)合物蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)解析、精修及分析
        2.2.15 pMHC復(fù)合物蛋白質(zhì)熱穩(wěn)定性試驗(yàn)
    2.3 結(jié)果
*3901的構(gòu)建">        2.3.1 表達(dá)載體pET-28b-HLA-B^*3901的構(gòu)建
*3901蛋白試表達(dá)及包涵體純化">        2.3.2 HLA-B^*3901蛋白試表達(dá)及包涵體純化
*3901復(fù)合物體外復(fù)性及純化">        2.3.3 pHLA-B^*3901復(fù)合物體外復(fù)性及純化
*3901復(fù)合物蛋白質(zhì)結(jié)晶及X-射線衍射數(shù)據(jù)收集">        2.3.4 pHLA-B^*3901復(fù)合物蛋白質(zhì)結(jié)晶及X-射線衍射數(shù)據(jù)收集
*3901復(fù)合物蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)解析">        2.3.5 pHLA-B^*3901復(fù)合物蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)解析
*3901復(fù)合物結(jié)構(gòu)分析">        2.3.6 N端乙酰化多肽與HLA-B^*3901復(fù)合物結(jié)構(gòu)分析
        2.3.7 N端乙�；瘜Χ嚯慕Y(jié)合穩(wěn)定性的影響
        2.3.8 N端乙�；瘜Ρ砦坏腡細(xì)胞免疫原性的影響
    2.4 小結(jié)與討論
第三章 N端乙酰化流感病毒表位的T細(xì)胞免疫學(xué)研究
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        3.2.1 主要商品試劑
        3.2.2 常用溶液及配制方法
        3.2.3 血樣的采集和處理
        3.2.4 HLA分型檢測
        3.2.5 人外周血單個核細(xì)胞（PBMCs）分離
        3.2.6 細(xì)胞的凍存及復(fù)蘇
        3.2.7 PBMCs體外刺激培養(yǎng)
+/CD8⁺細(xì)胞">        3.2.8 MACS技術(shù)磁珠分選CD4⁺/CD8⁺細(xì)胞
        3.2.9 ELISPOT操作過程（QuantoBio）
        3.2.10 pHLA復(fù)合物體外復(fù)性及純化
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 N端乙�；疶細(xì)胞表位預(yù)測
        3.3.2 N端乙酰化M1抗原表位T細(xì)胞免疫原性檢測
        3.3.3 N端乙�；鞲胁《颈砦籘細(xì)胞免疫水平調(diào)查
    3.4 討論
第四章 MHC Ⅰ類分子遞呈雙磷酸化抗原機(jī)制研究
    4.1 引言
    4.2 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        4.2.1 主要實(shí)驗(yàn)儀器、材料及試劑
        4.2.2 多肽合成
        4.2.3 主要實(shí)驗(yàn)方法
    4.3 結(jié)果
*2705復(fù)合物體外復(fù)性及純化">        4.3.1 pHLA-B^*2705復(fù)合物體外復(fù)性及純化
*2705復(fù)合物蛋白質(zhì)結(jié)晶及X-射線衍射數(shù)據(jù)收集">        4.3.2 pHLA-B^*2705復(fù)合物蛋白質(zhì)結(jié)晶及X-射線衍射數(shù)據(jù)收集
*2705復(fù)合物蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)解析">        4.3.3 pHLA-B^*2705復(fù)合物蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)解析
        4.3.4 HLA-B27限制性雙磷酸化多肽遞呈的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)
        4.3.5 磷酸基團(tuán)對HLA-B27結(jié)合和穩(wěn)定性的位點(diǎn)特異性影響
        4.3.6 磷酸基團(tuán)修飾對抗原特性及TCR識別的影響
    4.4 小結(jié)與討論
第五章 磷酸化表位T細(xì)胞免疫學(xué)及其T細(xì)胞受體研究
    5.1 引言
    5.2 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        5.2.1 主要商品試劑
        5.2.2 常用溶液及配制方法
        5.2.3 多肽合成
        5.2.4 引物設(shè)計與合成
        5.2.5 免疫佐劑gp96 N333表達(dá)與純化
        5.2.6 小鼠多肽免疫
        5.2.7 小鼠脾臟細(xì)胞分離
        5.2.8 ELISPOT操作過程（BD）
        5.2.9 小鼠脾細(xì)胞體外培養(yǎng)
        5.2.10 MHC Tetramer制備
        5.2.11 MHC Tetramer染色
6細(xì)胞）">        5.2.12 細(xì)胞總RNA提取（5～10×10⁶細(xì)胞）
        5.2.13 5’RACE擴(kuò)增TCR序列
        5.2.14 5’RACE擴(kuò)增TCR序列
    5.3 結(jié)果與討論
        5.3.1 gp96 N333蛋白免疫佐劑的表達(dá)純化
        5.3.2 磷酸化多肽對轉(zhuǎn)基因鼠的T細(xì)胞免疫原性監(jiān)測
        5.3.3 MHC四聚體染色分選磷酸化表位特異性T細(xì)胞
b轉(zhuǎn)基因小鼠T細(xì)胞受體序列擴(kuò)增">        5.3.4 HLA-A2.1/K^b轉(zhuǎn)基因小鼠T細(xì)胞受體序列擴(kuò)增
第六章 其它工作
    6.1 豬源病毒CTL表位多肽與SLA-1結(jié)合研究
        6.1.1 引言
        6.1.2 結(jié)果與討論
        6.1.3 小結(jié)與展望
    6.2 HLA-A3超類型交叉遞呈多肽的結(jié)構(gòu)學(xué)研究
        6.2.1 引言
        6.2.2 結(jié)果和討論
        6.2.3 小結(jié)與展望
參考文獻(xiàn)
附錄1 縮略詞表
致謝
在讀期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文與取得的其他研究成果



本文編號：3110677