工程化軟骨組織存在性能差和軟骨表型不穩(wěn)定的問題。本文基于海藻酸凝膠微球體系,針對細(xì)胞與細(xì)胞以及細(xì)胞與材料間的相互作用對于間充質(zhì)干細(xì)胞（Mesenchymal stem cells,MSCs）或軟骨細(xì)胞軟骨表型的影響,主要開展了以下三部分研究工作:首先,借助Transwell的間接共培養(yǎng)體系,考察了兔骨髓MSCs（rabbit MSCs,rMSCs）與兔關(guān)節(jié)軟骨（rabbit articular chondrocytes,rACs）細(xì)胞共培養(yǎng)的條件下的成軟骨分化。我們發(fā)現(xiàn),在共培養(yǎng)過程中,rMSC持續(xù)分泌軟骨特性基質(zhì)糖胺聚糖（Glycosaminoglycan,GAG）,在第7-14天,軟骨相關(guān)基因Col Ⅱ、COMP和Aggrecan表達(dá)量顯著上調(diào),在第28天肥大化相關(guān)基因Col Ⅹ和MMP13的表達(dá)量顯著下調(diào)。因此,通過與rACs的間接共培養(yǎng),能夠促進(jìn)并維持rMSCs的成軟骨分化表型。其次,基于轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)體系,制備了自發(fā)聚集的rACs細(xì)胞團(tuán)和載有rACs的微載體,并經(jīng)海藻酸包埋后考察了 rACs的生長和分化情況。我們發(fā)現(xiàn),培養(yǎng)14天后,兩者均無增殖現(xiàn)象,但表現(xiàn)出GAG的累積,而且微載體... 

【文章來源】：華東理工大學(xué)上海市 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：84 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 緒論
    1.1 關(guān)節(jié)軟骨組織
    1.2 關(guān)節(jié)軟骨損傷的臨床治療
    1.3 軟骨組織工程
        1.3.1 生物支架材料
        1.3.2 種子細(xì)胞
            1.3.2.1 軟骨細(xì)胞
            1.3.2.2 干細(xì)胞
    1.4 培養(yǎng)方式對軟骨細(xì)胞表型的影響
    1.5 MSCs成軟骨誘導(dǎo)分化的研究
    1.6 共培養(yǎng)在軟骨組織工程中的應(yīng)用
        1.6.1 共培養(yǎng)
        1.6.2 基于共培養(yǎng)誘導(dǎo)MSCs成軟骨分化
    1.7 研究內(nèi)容、目的和意義
第2章 海藻酸凝膠中MSCs與軟骨細(xì)胞間接共培養(yǎng)成軟骨分化研究
    2.1 前言
    2.2 材料與方法
        2.2.1 主要實驗試劑及來源
        2.2.2 細(xì)胞分離和培養(yǎng)
        2.2.3 細(xì)胞包埋
        2.2.4 共培養(yǎng)實驗設(shè)計
        2.2.5 死活染色
        2.2.6 MTT測定
        2.2.7 DNA、GAG定量檢測
        2.2.8 冷凍切片和石蠟切片制備
        2.2.9 H&E染色
        2.2.10 番紅-O染色
        2.2.11 天狼猩紅染色
        2.2.12 免疫組化染色
        2.2.13 掃描電子顯微鏡
        2.2.14 RT-PCR
        2.2.15 統(tǒng)計學(xué)分析
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 rMSCs在海藻酸鈉凝膠微球中的生長狀況
            2.3.1.1 死活染色
            2.3.1.2 MTT檢測和DNA含量
            2.3.1.3 組織學(xué)分析
            2.3.1.4 SEM觀察
        2.3.2 rACs在海藻酸鈉水凝膠微球中的生長狀況
            2.3.2.1 死活染色
            2.3.2.2 MTT檢測以及DNA和GAG含量
            2.3.2.3 組織學(xué)分析
            2.3.2.4 SEM觀察
        2.3.3 在共培養(yǎng)中rMSCs的成軟骨分化
            2.3.3.1 rMSCs凝膠微球的死活染色
            2.3.3.2 MTT、DNA和GAG檢測
            2.3.3.3 組織學(xué)分析
            2.3.3.4 rMSCs的基因表達(dá)分析
    2.4 討論
    2.5 結(jié)論
第3章 培養(yǎng)方式對軟骨細(xì)胞在海藻酸凝膠微球中表型的影響
    3.1 前言
    3.2 材料和方法
        3.2.1 rACs分離與培養(yǎng)
        3.2.2 基于微載體培養(yǎng)rACs
        3.2.3 軟骨聚團(tuán)制備
        3.2.4 海藻酸凝膠微球包埋
        3.2.5 死活染色
        3.2.6 MTT檢測
        3.2.7 DNA和GAG定量測定
        3.2.8 石蠟切片制備
        3.2.9 H&E染色
        3.2.10 番紅-O染色
        3.2.11 免疫熒光染色
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 基于微載體的rACs轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)
        3.3.2 rACs聚團(tuán)的制備
        3.3.3 海藻酸凝膠微球中rACs的死活染色
        3.3.4 海藻酸凝膠微球中rACs的MTT、DNA和GAG檢測
        3.3.5 組織學(xué)分析
    3.4 討論
    3.5 本章小結(jié)
第4章 MSCs在氧化處理的海藻酸凝膠微球中成軟骨分化研究
    4.1 概述
    4.2 材料與方法
        4.2.1 氧化處理海藻酸鈉
        4.2.2 傅里葉紅外光譜（FTIR）
        4.2.3 溶脹曲線
        4.2.4 降解曲線
        4.2.5 細(xì)胞包埋
        4.2.6 死活染色
        4.2.7 MTT檢測
        4.2.8 DNA、GAG含量測定
        4.2.9 H&E染色
        4.2.10 番紅-O染色
        4.2.11 統(tǒng)計學(xué)分析
    4.3 結(jié)果與討論
        4.3.1 氧化海藻酸的紅外表征結(jié)果
        4.3.2 海藻酸凝膠微球的溶脹和降解行為
        4.3.3 海藻酸凝膠微球的微觀結(jié)構(gòu)
        4.3.4 rMSCs在海藻酸凝膠微球中的活性
        4.3.5 MTT、DNA和GAG檢測
        4.3.6 組織學(xué)染色
    4.4 討論
    4.5 本章小結(jié)
第5章 全文總結(jié)和展望
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號：3108089