目的:利用生物信息學(xué)軟件評價(jià)幽門螺桿菌（Helicobacter pylori）多價(jià)表位疫苗CWAE的抗原結(jié)構(gòu),經(jīng)原核表達(dá)獲得高純度CWAE蛋白,進(jìn)而鑒定多價(jià)表位疫苗CWAE的免疫學(xué)性質(zhì)。方法:通過生物信息學(xué)軟件分析H. pylori多價(jià)表位疫苗CWAE的抗原結(jié)構(gòu);用人工合成的H. pylori多價(jià)表位肽融合基因WAE替換重組質(zhì)粒pET28a-CUE中的UE基因,構(gòu)建重組質(zhì)粒pET28aCWAE。然后,將pET28a-CWAE轉(zhuǎn)入大腸桿菌BL21（DE3）中,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá),并通過Ni-NTP鎳離子親和層析純化抗原蛋白CWAE;利用GM1-ELISA鑒定CWAE中CTB組分的黏膜免疫佐劑活性。最后,通過ELISA和小鼠脾臟淋巴細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)檢測CWAE激發(fā)BALB/c小鼠產(chǎn)生抗H.pylori抗體體液免疫和淋巴細(xì)胞免疫應(yīng)答的能力。結(jié)果:通過生物信息學(xué)軟件證實(shí)H. pylori多價(jià)表位疫苗CWAE具有科學(xué)合理的結(jié)構(gòu);重組表達(dá)質(zhì)粒pET28a-CWAE經(jīng)PCR、雙酶切和基因測序鑒定,融合基因CWAE與設(shè)計(jì)序列完全一致;重組基因工程菌株pET28a-CWAE/BL21（DE3）經(jīng)IPTG誘... 

【文章來源】：中國生物工程雜志. 2019,39(12)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：8 頁

【部分圖文】：

CWAE疫苗的抗原結(jié)構(gòu)和DNAstar分析

GM1-ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)隨CWAE和CTB蛋白濃度的降低，CWAE和CTB均與ELISA板包被的GM1結(jié)合量呈現(xiàn)下降趨勢，說明CWAE和CTB均能夠形成五聚體與神經(jīng)節(jié)苷脂GM1結(jié)合，即CWAE中CTB組分具有較好的黏膜免疫佐劑活性(圖4)。但是，與陽性對照CTB相比，CWAE中CTB組分的黏膜免疫佐劑活性還是有所下降，說明與CTB偶聯(lián)的WAE組分依舊對CTB黏膜免疫佐劑活性有影響，使CTB組分形成五聚體能力下降。圖3 CWAE抗原蛋白的表達(dá)和純化

CWAE抗原蛋白的表達(dá)和純化


本文編號(hào)：3108293