本文關(guān)鍵詞：PrP基因敲除小鼠的行為特征分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：我們對朊蛋白敲除(PrP-/-)小鼠行為學(xué)特征進行觀察分析,研究朊蛋白敲除后小鼠特征性行為學(xué)變化的機制,由此進一步探索朊蛋白的生物學(xué)功能。方法：行為學(xué)特征分析方面,將相同年齡、性別比例、健康狀況的小鼠分為WT組和PrP-/-組。首先對兩組小鼠進行抑郁癥行為學(xué)評價,依次進行糖水偏好實驗(sucrose preference test)、懸尾實驗(tail suspending test)、曠場實驗(open fieldtest)和強迫游泳實驗(forced swimming test),檢測PrP-/-小鼠是否具有抑郁樣傾向。接著,運用Morris水迷宮(Morris water maze)法,對WT組和PrP-/-組小鼠進行空間搜索和定位航行測試,評價PrP-/-小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力是否和WT小鼠有顯著性差異。最后,對兩組小鼠進行運動能力測試,包括轉(zhuǎn)棒實驗(rotary rod fatigue test)、平衡木實驗(beam balance test)和衣架實驗(coat hanger test),評價二者運動能力是否有顯著性差異。細胞水平探究方面,取WT組和PrP-/-組新生小鼠海馬原代細胞,研究朊蛋白敲除對神經(jīng)元興奮性受體NMDA受體(N-甲基-D-天冬氨酸受體)的影響,即MTT法測定細胞生存情況,比較分析是否PrP-/-細胞更易被NMDA誘導(dǎo)損傷,并比較分析經(jīng)NMDA誘導(dǎo)后的PrP-/-細胞的胞內(nèi)游離鈣離子濃度的變化。利用蛋白免疫印跡法測定PrP-/-和WT海馬神經(jīng)細胞上的SK通道蛋白的表達量,分析PrP的缺失是否會影響海馬神經(jīng)細胞上的SK通道蛋白的表達水平。結(jié)果：在抑郁癥行為學(xué)評價中發(fā)現(xiàn),雖然PrP-/-組小鼠在糖水偏好實驗、懸尾實驗和曠場實驗中的抑郁指標都顯著高于WT組小鼠,但在強迫游泳實驗中PrP-/-組小鼠的抑郁指標卻顯著低于WT組小鼠；Morris水迷宮實驗中,PrP-/-組小鼠在定位航行和空間搜索實驗中的表現(xiàn)均低于WT組小鼠；運動能力測試中,PrP-/-組小鼠在轉(zhuǎn)棒實驗、平衡木實驗和衣架實驗中的表現(xiàn)也均低于WT組。在細胞水平的檢測中發(fā)現(xiàn),不同濃度的NMDA作用5分鐘后,用Fluo 4-AM測定細胞內(nèi)游離鈣離子濃度,兩組細胞并無顯著性差異,但在高濃度的NMDA作用6天后,PrP-/-細胞的存活情況顯著低于WT細胞的存活情況。蛋白免疫印跡法結(jié)果表明PrP-/-和WT海馬神經(jīng)細胞上的SK通道蛋白的表達水平并無明顯差異。結(jié)論：行為學(xué)評價結(jié)果提示,PrP-/-小鼠可能具有抑郁樣傾向,但并不是天然的抑郁癥模型。PrP-/-小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力和運動能力可能均存在一定程度的缺陷。這些行為學(xué)特征反映了PrP-/-小鼠可能存在不同類型的行為學(xué)缺陷。細胞層面的結(jié)果表明缺乏PrP的海馬神經(jīng)元可能更容易受到NMDA的刺激而產(chǎn)生損傷,提示了PrP缺失的海馬神經(jīng)元上NMDA受體可能出現(xiàn)敏感性增強的現(xiàn)象,這也和行為學(xué)評價中PrP-/-小鼠學(xué)習(xí)記憶能力降低相符合。而不同濃度的NMDA作用后,PrP-/-海馬神經(jīng)元中的游離鈣離子濃度和WT相比并無明顯差異,PrP-/-海馬神經(jīng)元在高濃度NMDA作用下更容易出現(xiàn)損傷的具體途徑和機制還需要進一步的探索。另外,PrP-/-和WT海馬神經(jīng)細胞上的SK通道蛋白的表達水平并無明顯差異,說明PrP的缺失可能并不會影響海馬神經(jīng)細胞上的SK通道蛋白的表達水平。
【關(guān)鍵詞】：PrP 抑郁樣行為 學(xué)習(xí)記憶能力 運動能力 海馬神經(jīng)細胞 NMDA受體 SK通道
【學(xué)位授予單位】：華東師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R338
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-12
• 前言12-14
• 第一章 PrP敲除小鼠的行為學(xué)特征觀察14-31
• 前言14-15
• 1 材料與方法15-23
• 1.1 實驗材料15-16
• 1.2 實驗方法16-23
• 1.2.1 PrP~(-/-)小鼠的抑郁癥行為學(xué)評價16-19
• 1.2.1.1 糖水偏好實驗(sucrose preference test)16-17
• 1.2.1.2 曠場實驗(open field test)17
• 1.2.1.3 懸尾實驗(tail suspending test)17
• 1.2.1.4 強迫游泳實驗(forced swimming test)17-19
• 1.2.2 PrP~(-/-)小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力評價19-21
• 1.2.2.1 PrP~(-/-)小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力評價19-20
• 1.2.2.2 抗抑郁藥阿米替林對PrP~(-/-)小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力的影響20-21
• 1.2.3 運動能力實驗21-23
• 1.2.3.1 轉(zhuǎn)椿實驗（rotary rod test)21
• 1.2.3.2 平衡木實驗(beam walking test)21
• 1.2.3.3 衣架實驗(coat hanger test)21-23
• 2 結(jié)果23-29
• 2.1 抑郁癥行為學(xué)評價結(jié)果23-24
• 2.2 學(xué)習(xí)記憶能力評價結(jié)果24-28
• 2.3 運動能力評價結(jié)果28-29
• 3 討論29-31
• 第二章 PrP敲除小鼠海馬神經(jīng)細胞興奮性的初步探究31-48
• 前言31-33
• 1 材料與方法33-42
• 1.1 實驗材料33-37
• 1.1.1 實驗對象33
• 1.1.2 實驗試劑33-36
• 1.1.3 實驗器材36
• 1.1.4 實驗儀器36-37
• 1.2 實驗方法37-42
• 1.2.1 NMDA對PrP敲除新生小鼠海馬原代細胞的損傷作用37-39
• 1.2.2 NMDA對PrP敲除新生小鼠海馬原代細胞鈣離子濃度的影響39-40
• 1.2.3 PrP敲除小鼠海馬神經(jīng)元SK通道表達量的研究40-42
• 2 結(jié)果42-46
• 2.1 NMDA對PrP敲除新生小鼠海馬原代細胞的損傷作用42-44
• 2.2 NMDA對PrP敲除新生小鼠海馬原代細胞內(nèi)鈣離子濃度的影響44-46
• 2.3 PrP敲除小鼠海馬神經(jīng)元SK通道表達量的研究46
• 3 討論46-48
• 全文小結(jié)48-50
• 綜述50-57
• 參考文獻57-68
• 致謝68-69

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