幽門(mén)螺桿菌（Helicobacterpylori, H. pylori）是一種微需氧有鞭毛的螺旋型革蘭氏陰性菌,1982年由Marshall和Warren在人體胃中首次發(fā)現(xiàn)。H. pylori的全球人群感染率超過(guò)50%,在發(fā)展中國(guó)家感染率更高。H. pylori的感染是慢性胃炎、胃潰瘍等發(fā)生的重要危險(xiǎn)因素,也與胃癌的發(fā)生關(guān)系密切,胃癌的死亡率在腫瘤相關(guān)疾病死亡率中居第二位。H. pylori致病因子眾多,其中與腫瘤發(fā)生關(guān)系最密切的是細(xì)胞毒素相關(guān)基因致病島（cytotoxin-associated gene pathogenicity island, cagPAI）,在一半的西方型菌株和90%的東亞型菌株中均攜帶cagPAI9。cagPAI中編碼120-140kDa大小的CagA蛋白與胃癌的發(fā)生有密切關(guān)系。為了闡明CagA蛋白在H. pylori感染導(dǎo)致胃癌的致病機(jī)制中的作用,本課題組構(gòu)建了一株cagA基因敲除的突變菌株HP27CcagA-);經(jīng)過(guò)HP27（cagA-）突變株和野生菌HP27（cagA+）分別感染胃上皮細(xì)胞,利用雙向電泳和質(zhì)譜分析篩選兩組細(xì)菌感染引起的宿主細(xì)胞總蛋白的差異... 

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

pMD19-T質(zhì)粒圖譜

圖2 pcDNA3.1+質(zhì)粒圖譜Fig 2 The map of pcDlMA3.1 vector(1)鄭州大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院張巧教授惠贈(zèng)PCDNA3.1+真核的細(xì)菌接種于含Amp (100 |xg/mL)的LB固體平板，置于37養(yǎng)后挑取單克隆菌落接種于5 mL的LB液體培養(yǎng)基（A), 37 °C, 220 r/min培養(yǎng)過(guò)夜后，按照2.3.7.2堿裂解法提粒送深圳華大基因公司利用通用引物測(cè)序，測(cè)序結(jié)果與GenA3.1+基因進(jìn)行BLAST對(duì)比。對(duì)鑒定過(guò)的質(zhì)粒保種后存于-8(2) pcDNA3.1 +質(zhì)粒圖譜（圖2)6. 2 cad基因及表達(dá)載體pcDNA3. 1+質(zhì)粒的雙酶切(1)分別過(guò)夜培養(yǎng)10 mL含pMD19-T-ci/gJ和pcDNA3.1+5a,條件 37。C, 220 r/min；(2)利用堿裂解法中量提取pMD19-T-?/gJ和PCDNA3.1+質(zhì)(3)取質(zhì)粒 pMD19-T-cagJ 和 PCDNA3.1+ 用限制性?xún)?nèi)切酶

圖3 cagA基因PCR擴(kuò)增產(chǎn)物Fig 3 PCR production of cagA gene2，3： PCR production of cagA gene； 4: 1 Kb DN A LadderA 測(cè)序結(jié)果中提取質(zhì)粒pMD19-T-cag兒送深圳華大基因測(cè)序，cagJ基因測(cè)序結(jié)果輸入數(shù)據(jù)庫(kù)用BLAST對(duì)比，結(jié)和kozak序列外，其他基因序列同Genbank上登因完全-?致，Genbank登錄號(hào)DQ306710 (圖4，5 )。42

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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[3]幽門(mén)螺桿菌cag致病島cagI基因功能的研究[D]. 王華.江蘇大學(xué) 2011
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碩士論文
[1]應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)篩選胃癌細(xì)胞差異表達(dá)蛋白[D]. 孫曉宇.泰山醫(yī)學(xué)院 2012
[2]CD44與糖酵解相關(guān)分子在胃癌中的表達(dá)及意義[D]. 高晨.蘭州大學(xué) 2011



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