幽門螺桿菌（Helicobacterpylori, H. pylori）是一種微需氧有鞭毛的螺旋型革蘭氏陰性菌,1982年由Marshall和Warren在人體胃中首次發(fā)現(xiàn)。H. pylori的全球人群感染率超過50%,在發(fā)展中國家感染率更高。H. pylori的感染是慢性胃炎、胃潰瘍等發(fā)生的重要危險因素,也與胃癌的發(fā)生關系密切,胃癌的死亡率在腫瘤相關疾病死亡率中居第二位。H. pylori致病因子眾多,其中與腫瘤發(fā)生關系最密切的是細胞毒素相關基因致病島（cytotoxin-associated gene pathogenicity island, cagPAI）,在一半的西方型菌株和90%的東亞型菌株中均攜帶cagPAI9。cagPAI中編碼120-140kDa大小的CagA蛋白與胃癌的發(fā)生有密切關系。為了闡明CagA蛋白在H. pylori感染導致胃癌的致病機制中的作用,本課題組構建了一株cagA基因敲除的突變菌株HP27CcagA-);經(jīng)過HP27（cagA-）突變株和野生菌HP27（cagA+）分別感染胃上皮細胞,利用雙向電泳和質(zhì)譜分析篩選兩組細菌感染引起的宿主細胞總蛋白的差異... 

【文章來源】：鄭州大學河南省 211工程院校

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【學位級別】：博士

【部分圖文】：

pMD19-T質(zhì)粒圖譜

圖2 pcDNA3.1+質(zhì)粒圖譜Fig 2 The map of pcDlMA3.1 vector(1)鄭州大學公共衛(wèi)生學院張巧教授惠贈PCDNA3.1+真核的細菌接種于含Amp (100 |xg/mL)的LB固體平板，置于37養(yǎng)后挑取單克隆菌落接種于5 mL的LB液體培養(yǎng)基（A), 37 °C, 220 r/min培養(yǎng)過夜后，按照2.3.7.2堿裂解法提粒送深圳華大基因公司利用通用引物測序，測序結(jié)果與GenA3.1+基因進行BLAST對比。對鑒定過的質(zhì)粒保種后存于-8(2) pcDNA3.1 +質(zhì)粒圖譜（圖2)6. 2 cad基因及表達載體pcDNA3. 1+質(zhì)粒的雙酶切(1)分別過夜培養(yǎng)10 mL含pMD19-T-ci/gJ和pcDNA3.1+5a,條件 37。C, 220 r/min；(2)利用堿裂解法中量提取pMD19-T-?/gJ和PCDNA3.1+質(zhì)(3)取質(zhì)粒 pMD19-T-cagJ 和 PCDNA3.1+ 用限制性內(nèi)切酶

圖3 cagA基因PCR擴增產(chǎn)物Fig 3 PCR production of cagA gene2，3： PCR production of cagA gene； 4: 1 Kb DN A LadderA 測序結(jié)果中提取質(zhì)粒pMD19-T-cag兒送深圳華大基因測序，cagJ基因測序結(jié)果輸入數(shù)據(jù)庫用BLAST對比，結(jié)和kozak序列外，其他基因序列同Genbank上登因完全-?致，Genbank登錄號DQ306710 (圖4，5 )。42

【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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[2]CD44與糖酵解相關分子在胃癌中的表達及意義[D]. 高晨.蘭州大學 2011



本文編號：3048051