目的:手足口病是由二十多型腸道病毒引起的常見傳染病,目前僅腸道病毒71型（Enterovirus 71,EV71）有上市疫苗,難以控制手足口病的流行。鑒于腸道病毒型間交叉反應(yīng)性時有報道以及腸道病毒型間序列的高度同源性,本研究首先探討EV71滅活疫苗對手足口病多種病原的交叉保護作用,明確EV71疫苗預(yù)防其他手足口病病原的價值;其次,本研究利用具有交叉中和作用的EV71表位VP1-SP70和VP2-141,以及兼具佐劑活性和外源基因投遞能力的恥垢分枝桿菌作為載體,構(gòu)建可預(yù)防多種腸道病毒的基因重組恥垢分枝桿菌疫苗,探討恥垢分枝桿菌用于構(gòu)建手足口病疫苗的價值。方法:1.擴增培養(yǎng)18個型別腸道病毒分離株,測定其滴度;EV71滅活疫苗免疫大鼠制備抗血清,微量中和試驗檢測抗血清中EV71中和抗體效價及對其他手足口病病原的交叉中和抗體效價。PCR擴增腸道病毒P1片段后進行序列測定,測序結(jié)果用clustalx軟件多序列比對后利用MEGA6構(gòu)建系統(tǒng)進化樹。2.以質(zhì)粒pC149/mut-HBc-E1/2為模板,PCR擴增嵌合EV71中和表位VP1-SP70（E1）和VP2-141（E2）的融合基因HBc-E... 

【文章來源】：桂林醫(yī)學院廣西壯族自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：87 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

EV71滅活疫苗免疫大鼠的抗血清對部分腸道病毒具有交叉中和作用Fig.1TheantiserumofEV71inactivatedvaccinehadcross-neutralizationeffectonsomeenteroviruses（A）正常RD細胞和EV71感染的RD細胞（400×）

46圖 3 pC149/mut-HBc-E1/2 的擴增和鑒定Fig.3 Amplification and identification of pC149/mut-HBc-E1/2（A）pC149/mut-HBc-E1/2 圖譜。 水平條表示嵌合的目的蛋白 HBc-E1/2。（B）pC149/mut-HBc質(zhì)粒經(jīng) Nde I 和 HindIII 雙酶切鑒定圖。（C）pC149/mut-HBc-E1/2 質(zhì)粒測序峰圖。

圖 4 HBc-E1/2 在大腸桿菌中的表達及純化Fig.4 Expression and Purification of HBc-E1/2 in E.coli（A）DTT 處理樣本的 SDS-PAGE 圖。 M：彩色預(yù)染蛋白質(zhì) Marker ；1：ER2566:HBc-E1/2 IPTG前菌液；2：ER2566:HBc-E1/2 IPTG 6h 菌液；3：HBc-E1/2 純化蛋白。（B）未經(jīng) DTT 處理樣本的SDS-PAGE 圖。M：彩色預(yù)染蛋白質(zhì) Marker；1：ER2566:HBc-E1/2 IPTG 前菌液；2：ER2566:HBc-E1/2IPTG 6h 菌液；3：HBc-E1/2 純化蛋白。（C）抗 VP1-SP70 的 Western Blot 圖。 M：彩色預(yù)染蛋白質(zhì)Marker ；1、2、3 分別為 DTT 處理的 ER2566:HBc-E1/2 IPTG 前菌液、ER2566:HBc-E1/2 IPTG 6h菌液和 HBc-E1/2 純化蛋白；4、5、6 分別為未經(jīng) DTT 處理的 ER2566:HBc-E1/2 IPTG 前菌液、ER2566:HBc-E1/2 IPTG 6h 菌液和 HBc-E1/2 純化蛋白。（D）抗 VP2-141 的 Western Blot 圖。 M：彩色預(yù)染蛋白質(zhì) Marker ；1、2、3 分別為 DTT 處理的 ER2566:HBc-E1/2 IPTG 前菌液、ER2566:HBc-E1/2IPTG 6h 菌液和 HBc-E1/2 純化蛋白；4、5、6 分別為未經(jīng) DTT 處理的 ER2566:HBc-E1/2 IPTG 前菌液、ER2566:HBc-E1/2 IPTG 6h 菌液和 HBc-E1/2 純化蛋白。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Bioinformatic Analysis of Non-VP1 Capsid Protein of Coxsackievirus A6[J]. 劉洪波,陽廣菲,梁思佳,林軍.  Journal of Huazhong University of Science and Technology（Medical Sciences）. 2016(04)
[2]Hand Foot and Mouth Disease Due to Enterovirus 71 in Malaysia[J]. Kaw Bing Chua,Abdul Rasid Kasri.  Virologica Sinica. 2011(04)
[3]自噬抑制劑3-MA抑制EV71病毒顆粒的產(chǎn)生與釋放[J]. 張曉延,郗雪艷,趙振東.  中華實驗和臨床病毒學雜志. 2011 (03)
[4]Expression and immunoactivity of chimeric particulate antigens of receptor binding site-core antigen of hepatitis B virus[J]. Hai-Jie Yang, Min Chen, Tong Cheng, Shui-Zhen He, Shao-Wei Li, Bao-Quan Guan, Ying Gu, Zi-Heng Zhu, Jun Zhang, Ning-Shao Xia, The Key Laboratory of Ministry of Education for Cell Biology and Tumor Cell Engineering, Xiamen University, Xiamen 361005, Fujian Province, China.  World Journal of Gastroenterology. 2005(04)



本文編號：3046430