自首例艾滋�。ˋcquired Immune Deficiency Syndrom，AIDS）報道以來，艾滋病疫苗的研制工作一直在持續(xù)，但至今仍沒有艾滋病疫苗問世。本研究小組用多種艾滋病疫苗進行序貫聯(lián)合免疫取得了一定的效果。為了更合理地應用序貫聯(lián)合免疫策略，有必要深入了解每種疫苗單獨以及與其他疫苗聯(lián)合應用的特點。腺病毒載體和腺相關病毒載體是在疫苗和基因治療領域應用較廣的兩種載體，安全性也已得到驗證，所以我們選擇這兩種病毒載體疫苗作為候選疫苗。本研究旨在對前期工作中觀察到的腺相關病毒疫苗誘導的細胞和體液免疫反應分離的現(xiàn)象進行深入研究，同時研究這種現(xiàn)象能否在其他基因中再現(xiàn)以及腺病毒和腺相關病毒兩種病毒載體攜帶不同的基因進行單獨及聯(lián)合免疫所誘發(fā)的免疫反應的差異，為疫苗和基因治療的研究提供新的思路。本文將攜帶HIV-1gag基因的rAd5及rAAV2/1疫苗免疫BALB/c小鼠后，用ELISA方法檢測血清中Gag特異性及載體特異性的IgG抗體的滴度，用ELISPOT方法檢測細胞免疫反應。結果顯示，rAd5-gag可誘導較強的Gag特異性細胞免疫反應，同時也可產(chǎn)生載體特異性細胞免疫反應，Gag特... 

【文章來源】：北京工業(yè)大學北京市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
主要英文縮寫詞
摘要
Abstract
第1章 緒論
第2章 攜帶HIV-1gag基因的rAd5及rAAV2/1疫苗誘導免疫反應差異的研究
    2.1 材料
        2.1.1 實驗動物
        2.1.2 疫苗成分及來源
        2.1.3 刺激物（陽性刺激物、陰性刺激物及肽庫）來源
        2.1.4 培養(yǎng)基和試劑
        2.1.5 實驗儀器
    2.2 方法
        2.2.1 小鼠免疫方案
        2.2.2 血清和脾臟淋巴細胞的采集
        2.2.3 ELISPOT實驗
        2.2.4 ELISA檢測小鼠血清中 Gag 特異性和載體特異性體液免疫反應
    2.3 實驗結果
        2.3.1 rAd5-gag和 rAAV2/1-gag在小鼠體內(nèi)誘導的載體特異性及Gag特異性細胞免疫反應
        2.3.2 rAd5-gag和 rAAV2/1-gag在小鼠體內(nèi)誘導的載體特異性及P24特異性IgG 抗體反應
    2.4 討論
    2.5 本章小結
第3章 利用小鼠活體成像技術比較研究rAd5和rAAV2/1兩種載體的差異
    3.1 材料
        3.1.1 細胞
        3.1.2 載體成分及來源
        3.1.3 試劑
        3.1.4 主要儀器設備
        3.1.5 實驗動物
    3.2 方法
        3.2.1 rAd5-Luc病毒滴度的測定
        3.2.2 小鼠免疫
        3.2.3 小鼠體內(nèi)活體成像檢測
    3.3 結果
        3.3.1 rAd5-Luc滴度的測定
        3.3.2 小鼠活體成像結果
    3.4 討論
    3.5 本章小結
第4章 攜帶HIV-1 gp160/gp145基因的rAd5及rAAV2/1疫苗誘導免疫反應差異的研究
    4.1 材料
        4.1.1 菌株和質(zhì)粒
        4.1.2 細胞
        4.1.3 疫苗成分及來源
        4.1.4 假病毒
        4.1.5 工具酶和試劑
        4.1.6 抗體
        4.1.7 主要儀器設備
        4.1.8 實驗動物
    4.2 方法
        4.2.1 pSNAV2.0-neo-gp145質(zhì)粒的構建及鑒定
        4.2.2 rAAV2/1 苗rAAV2/1-gp145的構建流程
        4.2.3 小鼠免疫
        4.2.4 血清和脾臟淋巴細胞的采集
        4.2.5 酶聯(lián)免疫斑點法（ELISPOT）篩選肽庫和檢測細胞免疫反應
        4.2.6 ELISA法檢測體液免疫反應
    4.3 結果
        4.3.1 pSNAV2.0-neo和 pSNAV1.0-gp145 限制性內(nèi)切酶酶切電泳圖譜
        4.3.2 構建rAAV2/1表達質(zhì)粒 pSNAV2.0-neo-gp145
        4.3.3 重組質(zhì)粒pSNAV2.0-neo-gp145的酶切鑒定
        4.3.4 重組質(zhì)粒pSNAV2.0-neo-gp145的測序鑒定
        4.3.5 pSNAV2.0-neo-gp145瞬時轉染BHK細胞后gp145基因表達的鑒定
        4.3.6 細胞株BHK-gp145中gp145基因表達的鑒定
        4.3.7 rAAV2/1-gp145疫苗的感染性檢測
        4.3.8 用 ELISPOT法對HIV-1gag進行肽庫的篩選和細胞免疫反應檢測
        4.3.9 ELISA方法檢測體液免疫反應
    4.4 討論
        4.4.1 疫苗載體的選擇
        4.4.2 載體疫苗所攜帶基因的選擇
        4.4.3 免疫方案和免疫效果的分析
    4.5 本章小結
結論
參考文獻
攻讀碩士學位期間發(fā)表的學術論文
致謝



本文編號：3037788