自首例艾滋�。ˋcquired Immune Deficiency Syndrom，AIDS）報(bào)道以來，艾滋病疫苗的研制工作一直在持續(xù)，但至今仍沒有艾滋病疫苗問世。本研究小組用多種艾滋病疫苗進(jìn)行序貫聯(lián)合免疫取得了一定的效果。為了更合理地應(yīng)用序貫聯(lián)合免疫策略，有必要深入了解每種疫苗單獨(dú)以及與其他疫苗聯(lián)合應(yīng)用的特點(diǎn)。腺病毒載體和腺相關(guān)病毒載體是在疫苗和基因治療領(lǐng)域應(yīng)用較廣的兩種載體，安全性也已得到驗(yàn)證，所以我們選擇這兩種病毒載體疫苗作為候選疫苗。本研究旨在對前期工作中觀察到的腺相關(guān)病毒疫苗誘導(dǎo)的細(xì)胞和體液免疫反應(yīng)分離的現(xiàn)象進(jìn)行深入研究，同時研究這種現(xiàn)象能否在其他基因中再現(xiàn)以及腺病毒和腺相關(guān)病毒兩種病毒載體攜帶不同的基因進(jìn)行單獨(dú)及聯(lián)合免疫所誘發(fā)的免疫反應(yīng)的差異，為疫苗和基因治療的研究提供新的思路。本文將攜帶HIV-1gag基因的rAd5及rAAV2/1疫苗免疫BALB/c小鼠后，用ELISA方法檢測血清中Gag特異性及載體特異性的IgG抗體的滴度，用ELISPOT方法檢測細(xì)胞免疫反應(yīng)。結(jié)果顯示，rAd5-gag可誘導(dǎo)較強(qiáng)的Gag特異性細(xì)胞免疫反應(yīng)，同時也可產(chǎn)生載體特異性細(xì)胞免疫反應(yīng)，Gag特... 

【文章來源】：北京工業(yè)大學(xué)北京市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
主要英文縮寫詞
摘要
Abstract
第1章 緒論
第2章 攜帶HIV-1gag基因的rAd5及rAAV2/1疫苗誘導(dǎo)免疫反應(yīng)差異的研究
    2.1 材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)動物
        2.1.2 疫苗成分及來源
        2.1.3 刺激物（陽性刺激物、陰性刺激物及肽庫）來源
        2.1.4 培養(yǎng)基和試劑
        2.1.5 實(shí)驗(yàn)儀器
    2.2 方法
        2.2.1 小鼠免疫方案
        2.2.2 血清和脾臟淋巴細(xì)胞的采集
        2.2.3 ELISPOT實(shí)驗(yàn)
        2.2.4 ELISA檢測小鼠血清中 Gag 特異性和載體特異性體液免疫反應(yīng)
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 rAd5-gag和 rAAV2/1-gag在小鼠體內(nèi)誘導(dǎo)的載體特異性及Gag特異性細(xì)胞免疫反應(yīng)
        2.3.2 rAd5-gag和 rAAV2/1-gag在小鼠體內(nèi)誘導(dǎo)的載體特異性及P24特異性IgG 抗體反應(yīng)
    2.4 討論
    2.5 本章小結(jié)
第3章 利用小鼠活體成像技術(shù)比較研究rAd5和rAAV2/1兩種載體的差異
    3.1 材料
        3.1.1 細(xì)胞
        3.1.2 載體成分及來源
        3.1.3 試劑
        3.1.4 主要儀器設(shè)備
        3.1.5 實(shí)驗(yàn)動物
    3.2 方法
        3.2.1 rAd5-Luc病毒滴度的測定
        3.2.2 小鼠免疫
        3.2.3 小鼠體內(nèi)活體成像檢測
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 rAd5-Luc滴度的測定
        3.3.2 小鼠活體成像結(jié)果
    3.4 討論
    3.5 本章小結(jié)
第4章 攜帶HIV-1 gp160/gp145基因的rAd5及rAAV2/1疫苗誘導(dǎo)免疫反應(yīng)差異的研究
    4.1 材料
        4.1.1 菌株和質(zhì)粒
        4.1.2 細(xì)胞
        4.1.3 疫苗成分及來源
        4.1.4 假病毒
        4.1.5 工具酶和試劑
        4.1.6 抗體
        4.1.7 主要儀器設(shè)備
        4.1.8 實(shí)驗(yàn)動物
    4.2 方法
        4.2.1 pSNAV2.0-neo-gp145質(zhì)粒的構(gòu)建及鑒定
        4.2.2 rAAV2/1 苗rAAV2/1-gp145的構(gòu)建流程
        4.2.3 小鼠免疫
        4.2.4 血清和脾臟淋巴細(xì)胞的采集
        4.2.5 酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法（ELISPOT）篩選肽庫和檢測細(xì)胞免疫反應(yīng)
        4.2.6 ELISA法檢測體液免疫反應(yīng)
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 pSNAV2.0-neo和 pSNAV1.0-gp145 限制性內(nèi)切酶酶切電泳圖譜
        4.3.2 構(gòu)建rAAV2/1表達(dá)質(zhì)粒 pSNAV2.0-neo-gp145
        4.3.3 重組質(zhì)粒pSNAV2.0-neo-gp145的酶切鑒定
        4.3.4 重組質(zhì)粒pSNAV2.0-neo-gp145的測序鑒定
        4.3.5 pSNAV2.0-neo-gp145瞬時轉(zhuǎn)染BHK細(xì)胞后gp145基因表達(dá)的鑒定
        4.3.6 細(xì)胞株BHK-gp145中g(shù)p145基因表達(dá)的鑒定
        4.3.7 rAAV2/1-gp145疫苗的感染性檢測
        4.3.8 用 ELISPOT法對HIV-1gag進(jìn)行肽庫的篩選和細(xì)胞免疫反應(yīng)檢測
        4.3.9 ELISA方法檢測體液免疫反應(yīng)
    4.4 討論
        4.4.1 疫苗載體的選擇
        4.4.2 載體疫苗所攜帶基因的選擇
        4.4.3 免疫方案和免疫效果的分析
    4.5 本章小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
致謝



本文編號：3037788