本文關(guān)鍵詞：學(xué)習(xí)記憶過(guò)程中蛋白激酶A催化亞基β在大鼠丘腦外側(cè)背核內(nèi)的表達(dá)，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:大鼠丘腦外側(cè)背核(The lateral dorsal thalamic nucleus,LD)是背側(cè)丘腦的重要組成部分,分為背內(nèi)側(cè)部(LDDM)和腹外側(cè)部(LDVL)兩部分。已有實(shí)驗(yàn)證明丘腦背外側(cè)核與空間學(xué)習(xí)和記憶有關(guān),包括空間參照記憶和空間工作記憶。蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)又稱依賴于cAMP的蛋白激酶A(cyclic-AMPdependent protein kinaseA)在學(xué)習(xí)記憶的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中也起重要作用。本實(shí)驗(yàn)研究旨在應(yīng)用Morris水迷宮行為學(xué)建模實(shí)驗(yàn)、免疫組化法染色(immunohistochemistry,IHC)技術(shù)和蛋白免疫印跡分析(Western Blot)技術(shù),觀察建模成功大鼠丘腦外側(cè)背核中蛋白激酶A(PKA)Cβ亞基的表達(dá)和分布情況,為深入闡明其在丘腦外側(cè)背核對(duì)學(xué)習(xí)記憶的神經(jīng)生物學(xué)機(jī)制提供新穎的形態(tài)學(xué)資料。方法:本實(shí)驗(yàn)選用成年雄性wistar大鼠40只,體重200-250 g,隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組,兩組大鼠進(jìn)行為期4天的Morris水迷宮定位航行實(shí)驗(yàn)及1天空間探索實(shí)驗(yàn),實(shí)驗(yàn)組大鼠水中放置平臺(tái)進(jìn)行空間學(xué)習(xí)記憶模型訓(xùn)練,對(duì)照組大鼠水中不放置平臺(tái)不給予空間學(xué)習(xí)記憶訓(xùn)練�？臻g探索實(shí)驗(yàn)后兩小時(shí)內(nèi)進(jìn)行乙醚吸入麻醉及水合氯醛(4%)腹腔麻醉,仰臥固定大鼠,充分暴露心臟,4%多聚甲醛心臟灌流固定(Western Blot只用0.9%生理鹽水灌流),斷頭取腦。大腦置于4%多聚甲醛中4°C過(guò)夜次日即可用震蕩切片機(jī)連續(xù)冠狀切片,片厚30μm。采用兔抗鼠PKA-Cβ亞基抗體作為標(biāo)記物,應(yīng)用免疫組化法染色技術(shù)觀察PKA-Cβ亞基在學(xué)習(xí)記憶過(guò)程中在丘腦外側(cè)背核內(nèi)的表達(dá)和分布情況,顯微鏡拍照并進(jìn)行圖像分析。Western Blotting實(shí)驗(yàn)中,提取丘腦外側(cè)背核組織蛋白,電泳,轉(zhuǎn)印至PVDF膜,目標(biāo)蛋白為PKA-Cβ亞基,內(nèi)參為β-actin,凝膠成像儀成像,進(jìn)行圖像分析。組間比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn),組內(nèi)比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)。Morris水迷宮行為學(xué)建模訓(xùn)練中大鼠不同天數(shù)逃避潛伏期的比較采用單因素方差分析。結(jié)果:1.Morris水迷宮行為學(xué)建模實(shí)驗(yàn)結(jié)果:選取實(shí)驗(yàn)組大鼠為期4天的定位航行實(shí)驗(yàn)及第5天空間探索實(shí)驗(yàn)“逃避潛伏期”數(shù)據(jù)進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn):定位航行實(shí)驗(yàn)中,隨著訓(xùn)練天數(shù)的增多,實(shí)驗(yàn)組大鼠平均“逃避潛伏期”逐漸縮短。每一天平均“逃避潛伏期”相互比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P0.05,但第2天與第3天相比較除外,P0.05。第5天空間探索實(shí)驗(yàn)與第4天定位航行實(shí)驗(yàn)中大鼠平均“逃避潛伏期”相互比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P0.05。2.免疫組織化學(xué)結(jié)果:蛋白激酶A(PKA)Cβ亞基免疫陽(yáng)性產(chǎn)物在實(shí)驗(yàn)組大鼠丘腦外側(cè)背核內(nèi)主要位于神經(jīng)元胞核和神經(jīng)纖維中。通過(guò)對(duì)免疫陽(yáng)性產(chǎn)物的累積光密度值分析,實(shí)驗(yàn)組大鼠丘腦外側(cè)背核內(nèi)PKA-Cβ亞基在LDDM和LDVL區(qū)免疫陽(yáng)性產(chǎn)物累積光密度值與對(duì)照組大鼠丘腦外側(cè)背核內(nèi)PKA-Cβ亞基在LDDM和LDVL區(qū)免疫陽(yáng)性產(chǎn)物累積光密度值相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);實(shí)驗(yàn)組LDDM區(qū)與LDVL區(qū)比較,兩者間PKA-Cβ亞基免疫陽(yáng)性產(chǎn)物差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。3.Western Blot結(jié)果:在整個(gè)丘腦外側(cè)背核組織內(nèi),蛋白激酶A(PKA)Cβ亞基在實(shí)驗(yàn)組的表達(dá)水平與對(duì)照組相比有所增高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)結(jié)論:學(xué)習(xí)記憶過(guò)程中蛋白激酶A(PKA)Cβ亞基在建立學(xué)習(xí)記憶模型大鼠的丘腦外側(cè)背核內(nèi)表達(dá)升高,說(shuō)明丘腦外側(cè)背核參與空間學(xué)習(xí)記憶的機(jī)制可能與這種蛋白表達(dá)變化有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：大鼠 學(xué)習(xí)記憶 PKA-Cβ亞基 丘腦外側(cè)背核 Morris水迷宮
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R338.64
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 前言10-13
• 材料和方法13-20
• 1.實(shí)驗(yàn)材料13-14
• 2.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物14
• 3.實(shí)驗(yàn)方法14-18
• 4.圖像分析18-19
• 5.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理19-20
• 結(jié)果20-24
• 附圖24-28
• 討論28-34
• 結(jié)論34-35
• 參考文獻(xiàn)35-40
• 綜述40-52
• 參考文獻(xiàn)47-52
• 致謝52-53

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中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 劉青;韓丹;汪勝;鄒祖玉;;電刺激大鼠尾殼核誘導(dǎo)丘腦外側(cè)背核神經(jīng)元出現(xiàn)與海馬電圖變化相關(guān)的特征性放電脈沖間隔(英文)[J];生理學(xué)報(bào);2005年05期

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 張麗麗;學(xué)習(xí)記憶過(guò)程中蛋白激酶A催化亞基β在大鼠丘腦外側(cè)背核內(nèi)的表達(dá)[D];大連醫(yī)科大學(xué);2015年

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本文編號(hào)：303504