發(fā)布時間：2021-02-06 06:44

　　目的:探究Notch信號和Neurogulin-1/Erb B途徑在大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞（MSCs）分化為施萬（SCs）樣細胞過程中的作用。方法:用高糖培養(yǎng)基分離大鼠BMSCs并用胎牛血清（FBS）、α-MEM培養(yǎng)基進行原代培養(yǎng),對所得細胞用β-巰基乙醇（β-ME）、全反式維甲酸（RA）、血小板衍生因子（PDGF-AA）、堿性成纖維生長因子（b FGF）、福斯科林Forskolin、Heregulin進行誘導分化后,Notch信號途徑分為干細胞對照組、全誘導劑組、阻斷劑組,其中阻斷劑組在誘導時加入Notch途徑阻斷劑DAPT。采用定量RT-PCR測定Jagg1配體,Hes1靶基因,Notch1,Dll1的受體蛋白及信號蛋白（S100,p75,GFAP）的表達;CCK-8測定細胞增殖情況;流式細胞儀檢測MSCs的凋亡。Neurogulin-1/Erb B途徑實驗分為經(jīng)誘導的施萬樣細胞組,添加Mubritinib組,在分化過程中去除Heregulin組。細胞免疫熒光技術(shù)和流式細胞術(shù)檢測檢測細胞分化水平及比率。CCK-8檢測各組細胞誘導過程中的增殖能力的變化,Annexin V法檢測各組細胞... 

【文章來源】：青島大學山東省

【文章頁數(shù)】：50 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
引言
材料和方法
    1 材料
        1.1 主要實驗儀器
        1.2 主要實驗試劑
    2 方法
        2.1 大鼠MSCs的分離培養(yǎng)（Notch信號途徑）
        2.2 MSCs誘導分化
        2.3 細胞分組
        2.4 免疫熒光染色
        2.5 RNA提取和逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）基因表達分析
        2.6 細胞計數(shù)試劑盒（CCK-8）測定
        2.7 細胞凋亡檢測
        2.8 細胞分組（Neurogulin-1/Erb B途徑）
        2.9 RNA提取和逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）及基因表達的實時PCR分析
        2.10 免疫熒光
        2.11 AnnexinV法檢測細胞凋亡[22]
        2.12 CCK-8檢測細胞增殖能力
        2.13 數(shù)據(jù)和統(tǒng)計學分析
結(jié)果
    1.1 GFAP,p75,S100結(jié)果（Notch途徑）
    1.2 CCK-8法測定細胞增殖（Notch途徑）
    1.3 細胞凋亡率（Notch途徑）
    1.4 RT-PCR檢測Jagg1,Hes1,Notch1,Dll1的mRNA水平（Notch途徑）
    1.5 MSC定向分化為施萬樣細胞形態(tài)學結(jié)果（Neurogulin-1/ErbB途徑）
    1.6 Neurogulin-1/ErbB促進SC的增殖能力（Neurogulin-1/ErbB途徑）
    1.7 細胞凋亡率的檢測結(jié)果（Neurogulin-1/ErbB途徑）
    1.8 MSC誘導分化為SCs
    1.9 免疫熒光檢測S100、p75、GFAP結(jié)果（Neurogulin-1/ErbB途徑）
    1.10 RT-PCR檢測結(jié)果（Neurogulin-1/ErbB途徑）
    1.11 ErbB2和ErbB3的mRNA表達（Neurogulin-1/ErbB途徑）
討論
參考文獻
綜述
    綜述參考文獻
攻讀學位期間的研究成果
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
[1]Neuregulin在調(diào)節(jié)神經(jīng)前體細胞增殖以及少突膠質(zhì)細胞分化過程中的相關(guān)機制[D]. 賴晨.中國科學院研究生院（上海生命科學研究院） 2004



本文編號：3020331