發(fā)布時(shí)間：2021-02-06 06:44

　　目的:探究Notch信號(hào)和Neurogulin-1/Erb B途徑在大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（MSCs）分化為施萬(wàn)（SCs）樣細(xì)胞過(guò)程中的作用。方法:用高糖培養(yǎng)基分離大鼠BMSCs并用胎牛血清（FBS）、α-MEM培養(yǎng)基進(jìn)行原代培養(yǎng),對(duì)所得細(xì)胞用β-巰基乙醇（β-ME）、全反式維甲酸（RA）、血小板衍生因子（PDGF-AA）、堿性成纖維生長(zhǎng)因子（b FGF）、福斯科林Forskolin、Heregulin進(jìn)行誘導(dǎo)分化后,Notch信號(hào)途徑分為干細(xì)胞對(duì)照組、全誘導(dǎo)劑組、阻斷劑組,其中阻斷劑組在誘導(dǎo)時(shí)加入Notch途徑阻斷劑DAPT。采用定量RT-PCR測(cè)定Jagg1配體,Hes1靶基因,Notch1,Dll1的受體蛋白及信號(hào)蛋白（S100,p75,GFAP）的表達(dá);CCK-8測(cè)定細(xì)胞增殖情況;流式細(xì)胞儀檢測(cè)MSCs的凋亡。Neurogulin-1/Erb B途徑實(shí)驗(yàn)分為經(jīng)誘導(dǎo)的施萬(wàn)樣細(xì)胞組,添加Mubritinib組,在分化過(guò)程中去除Heregulin組。細(xì)胞免疫熒光技術(shù)和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)檢測(cè)細(xì)胞分化水平及比率。CCK-8檢測(cè)各組細(xì)胞誘導(dǎo)過(guò)程中的增殖能力的變化,Annexin V法檢測(cè)各組細(xì)胞... 

【文章來(lái)源】：青島大學(xué)山東省

【文章頁(yè)數(shù)】：50 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
引言
材料和方法
    1 材料
        1.1 主要實(shí)驗(yàn)儀器
        1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑
    2 方法
        2.1 大鼠MSCs的分離培養(yǎng)（Notch信號(hào)途徑）
        2.2 MSCs誘導(dǎo)分化
        2.3 細(xì)胞分組
        2.4 免疫熒光染色
        2.5 RNA提取和逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）基因表達(dá)分析
        2.6 細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒（CCK-8）測(cè)定
        2.7 細(xì)胞凋亡檢測(cè)
        2.8 細(xì)胞分組（Neurogulin-1/Erb B途徑）
        2.9 RNA提取和逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）及基因表達(dá)的實(shí)時(shí)PCR分析
        2.10 免疫熒光
        2.11 AnnexinV法檢測(cè)細(xì)胞凋亡[22]
        2.12 CCK-8檢測(cè)細(xì)胞增殖能力
        2.13 數(shù)據(jù)和統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
結(jié)果
    1.1 GFAP,p75,S100結(jié)果（Notch途徑）
    1.2 CCK-8法測(cè)定細(xì)胞增殖（Notch途徑）
    1.3 細(xì)胞凋亡率（Notch途徑）
    1.4 RT-PCR檢測(cè)Jagg1,Hes1,Notch1,Dll1的mRNA水平（Notch途徑）
    1.5 MSC定向分化為施萬(wàn)樣細(xì)胞形態(tài)學(xué)結(jié)果（Neurogulin-1/ErbB途徑）
    1.6 Neurogulin-1/ErbB促進(jìn)SC的增殖能力（Neurogulin-1/ErbB途徑）
    1.7 細(xì)胞凋亡率的檢測(cè)結(jié)果（Neurogulin-1/ErbB途徑）
    1.8 MSC誘導(dǎo)分化為SCs
    1.9 免疫熒光檢測(cè)S100、p75、GFAP結(jié)果（Neurogulin-1/ErbB途徑）
    1.10 RT-PCR檢測(cè)結(jié)果（Neurogulin-1/ErbB途徑）
    1.11 ErbB2和ErbB3的mRNA表達(dá)（Neurogulin-1/ErbB途徑）
討論
參考文獻(xiàn)
綜述
    綜述參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間的研究成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]雪旺氏細(xì)胞移植修復(fù)脊髓損傷的研究進(jìn)展[J]. 郭巍,李巖,劉燊,徐云強(qiáng),馮世慶.  中華實(shí)驗(yàn)外科雜志. 2016 (03)
[2]Transplantation of human telomerase reverse transcriptase gene-transfected Schwann cells for repairing spinal cord injury[J]. Shu-quan Zhang,Min-fei Wu,Jia-bei Liu,Ye Li,Qing-san Zhu,Rui Gu.  Neural Regeneration Research. 2015(12)
[3]骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化的類施萬(wàn)細(xì)胞對(duì)大鼠脊髓損傷的作用[J]. 宗海斌,李愛國(guó),董玉珍.  廣東醫(yī)學(xué). 2012(22)
[4]成年SD鼠骨髓基質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)元樣細(xì)胞分化過(guò)程中分化與凋亡關(guān)系的研究[J]. 張蒙夏,謝富康.  中國(guó)病理生理雜志. 2003(01)
[5]成人骨髓間質(zhì)干細(xì)胞定向誘導(dǎo)為神經(jīng)元樣細(xì)胞的研究[J]. 項(xiàng)鵬,夏文杰,張麗蓉,陳振光,張秀明,李艷,李樹濃.  中國(guó)病理生理雜志. 2001(05)
[6]γ-分泌酶抑制劑對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞增殖和分化的影響[J]. 蔡良知3,林玲,胡建石,鄭志竑.  中華醫(yī)學(xué)雜志. 2008 (07)

博士論文
[1]Neuregulin在調(diào)節(jié)神經(jīng)前體細(xì)胞增殖以及少突膠質(zhì)細(xì)胞分化過(guò)程中的相關(guān)機(jī)制[D]. 賴晨.中國(guó)科學(xué)院研究生院（上海生命科學(xué)研究院） 2004



本文編號(hào)：3020331