研究背景及目的:Akt是一種絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶,在介導(dǎo)生長(zhǎng)因子信號(hào)中發(fā)揮重要作用。Akt調(diào)控細(xì)胞周期進(jìn)程,在細(xì)胞存活、生長(zhǎng)與增殖、糖代謝以及染色體穩(wěn)定性等生物過(guò)程中發(fā)揮重要功能。眾多研究已經(jīng)表明,Akt與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān),是介導(dǎo)腫瘤代謝Warburg效應(yīng)的重要分子,是一種重要的癌基因。因此,研究Akt蛋白激酶的分子調(diào)控機(jī)制具有重要的理論價(jià)值和潛在的臨床應(yīng)用價(jià)值。盡管已有大量文獻(xiàn)報(bào)道G1-S期Akt相關(guān)信號(hào)通路的調(diào)控機(jī)制,但G2/M期Akt的分子調(diào)控機(jī)制尚不清楚。APC/C泛素E3連接酶作為G2/M期細(xì)胞周期演進(jìn)的最主要調(diào)控分子復(fù)合體,通過(guò)Cdc20和Cdh1這兩個(gè)激活分子（Activator）,分別識(shí)別底物分子的D-box、KEN-box序列,對(duì)底物分子進(jìn)行泛素化修飾,致使蛋白酶體依賴性的底物分子降解,促成細(xì)胞周期演進(jìn)。本研究旨在揭示G2/M期Akt活性變化,探討APC/C對(duì)Akt活性的調(diào)控作用及其分子機(jī)制。研究方法:（1）用Nocodazole（諾考達(dá)唑）對(duì)細(xì)胞進(jìn)行同步化處理,使細(xì)胞周期阻滯于G2/M期,采用流式細(xì)胞術(shù)（Flow Cytometry,FCM）加以驗(yàn)證。（2... 

【文章來(lái)源】：江蘇大學(xué)江蘇省

【文章頁(yè)數(shù)】：69 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 緒論
    1.1 Akt的研究背景
        1.1.1 Akt的結(jié)構(gòu)
        1.1.2 Akt的活化與相關(guān)信號(hào)通路
        1.1.3 Akt的功能
        1.1.4 Akt與腫瘤的關(guān)系
    1.2 細(xì)胞周期的研究背景
        1.2.1 細(xì)胞周期的分期
        1.2.2 細(xì)胞周期的調(diào)控
        1.2.3 細(xì)胞周期的同步化
    1.3 APC/C的研究背景
        1.3.1 APC/C的結(jié)構(gòu)
        1.3.2 APC/C介導(dǎo)的泛素-蛋白酶體降解途徑
        1.3.3 APC/C主要的輔助因子和靶蛋白
        1.3.4 APC/C對(duì)細(xì)胞周期的調(diào)控及其與腫瘤的關(guān)系
第二章 研究目的、方法、內(nèi)容和研究意義
    2.1 研究目的
    2.2 研究方法
    2.3 研究?jī)?nèi)容
        2.3.1 G2/M期Akt活性變化及其與Cdh1、Cdc20表達(dá)水平之間的關(guān)系研究
        2.3.2 G2/M期Akt活性調(diào)控的分子機(jī)制研究
        2.3.3 G2-M期Akt活性下降對(duì)細(xì)胞凋亡的影響
    2.4 研究意義
第三章 G2/M期Akt活性的變化以及APC/C調(diào)控Akt活性的機(jī)制
    3.1 實(shí)驗(yàn)儀器和材料
        3.1.1 主要的實(shí)驗(yàn)儀器
        3.1.2 材料
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        3.2.2 細(xì)胞同步化處理
        3.2.3 同步化細(xì)胞蛋白提取和蛋白相對(duì)定量
        3.2.4 免疫印跡法（immunoblot）
        3.2.5 質(zhì)粒的制備
        3.2.6 轉(zhuǎn)染
        3.2.7 流式細(xì)胞術(shù)（FCM）
            3.2.7.1 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期
            3.2.7.2 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 細(xì)胞同步化后細(xì)胞形態(tài)及細(xì)胞周期的變化
        3.3.2 G2/M期Akt活性變化及其與Cdh1、Cdc20表達(dá)水平之間的關(guān)系研究
        3.3.3 G2/M期Akt活性調(diào)控的分子機(jī)制研究
        3.3.4 Akt上游調(diào)控分子在細(xì)胞周期中的變化研究
        3.3.5 G2/M期AKT活性的抑制可促進(jìn)細(xì)胞凋亡
    3.4 討論
第四章 結(jié)論及展望
    4.1 主要結(jié)論
    4.2 展望
參考文獻(xiàn)
綜述：促后期復(fù)合物（APC/C）對(duì)有絲分裂期（M期）的調(diào)控作用
    參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文及相關(guān)科研成果


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]PI3K/Akt抑制劑對(duì)肺癌細(xì)胞化療藥物敏感性的影響[J]. 余祖濱,白莉,張國(guó)強(qiáng),閔家新,肖穎彬.  重慶醫(yī)學(xué). 2009(11)



本文編號(hào)：3017823