本文關(guān)鍵詞：人臍血間充質(zhì)干細(xì)胞定向誘導(dǎo)分化為類許旺細(xì)胞的生物學(xué)特性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景:當(dāng)今社會周圍神經(jīng)損傷的發(fā)生率特別高,對于缺損長度超過2cm的損傷目前尚無理想的解決辦法,近些年生物工程學(xué)的發(fā)展和干細(xì)胞研究深入開展給神經(jīng)損傷的治療帶來新希望。種子細(xì)胞即許旺細(xì)胞一直是研究的“瓶頸”,自體及異體的許旺細(xì)胞因其自身的缺點(diǎn)未能得到大規(guī)模使用,由干細(xì)胞體外誘導(dǎo)而來的類許旺細(xì)胞具有廣闊的應(yīng)用前景,如何證明所誘導(dǎo)的類許旺細(xì)胞具有許旺細(xì)胞的功能至關(guān)重要,許旺細(xì)胞具有強(qiáng)大的自分泌和旁分泌功能,這可能是其發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)的機(jī)制之一,因此如能證明所誘導(dǎo)的類許旺細(xì)胞可以分泌真正許旺細(xì)胞分泌的一些功能性蛋白,則可以為后期的進(jìn)一步研究提供實(shí)驗(yàn)理論依據(jù)。目的:分別收集人臍血間充質(zhì)干細(xì)胞、由干細(xì)胞誘導(dǎo)分化而來的類許旺細(xì)胞以及人引產(chǎn)胎兒來源的許旺細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)上清液,提取其中的蛋白,運(yùn)用雙向電泳技術(shù)比較三種細(xì)胞的分泌蛋白差異性及相似性,查詢相關(guān)蛋白的主要功能。方法:按照本課題組之前使用的先用羥乙基淀粉沉淀紅細(xì)胞,再運(yùn)用人淋巴細(xì)胞分離液離心提取原代間充質(zhì)干細(xì)胞,通過形態(tài)學(xué)和流式細(xì)胞儀測定細(xì)胞表面標(biāo)志物等方法鑒定和測定其純度,符合要求者進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn),取第三代干細(xì)胞采用本課題組之前優(yōu)化的誘導(dǎo)方法進(jìn)行體外人工誘導(dǎo)。采用酶消化法制備人許旺細(xì)胞。對三種細(xì)胞(間充質(zhì)干細(xì)胞,類許旺細(xì)胞,許旺細(xì)胞)采用“逐步過度法”過度到無血清培養(yǎng),收集三種細(xì)胞培養(yǎng)上清液,用0.22um濾器過濾去除殘留細(xì)胞,加入1mM濃度的蛋白酶抑制劑后放入超低溫冰箱(-80℃)備用。提取培養(yǎng)液里的分泌蛋白,運(yùn)用雙向電泳和質(zhì)譜分析技術(shù)尋找差異顯著蛋白,對間充質(zhì)干細(xì)胞比許旺細(xì)胞少的蛋白和類許旺細(xì)胞比間充質(zhì)干細(xì)胞多的蛋白進(jìn)行匹配,查詢其蛋白的主要功能。結(jié)果:1)2-D凝膠電泳圖具有較好的分辨率及重復(fù)性,平均每張膠的蛋白表達(dá)點(diǎn)有三千左右,匹配率各自是96%、97%、98%。2)誘導(dǎo)前的HUCBMSCs與SCs有397個(gè)蛋白差異點(diǎn),誘導(dǎo)后的類SCs與SCs僅有280個(gè)差異蛋白點(diǎn),說明間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)為類許旺細(xì)胞后在分泌蛋白組學(xué)方面更相似于許旺細(xì)胞3)對于按照篩選標(biāo)準(zhǔn)篩選出的12個(gè)差異蛋白進(jìn)行質(zhì)譜鑒定,最終鑒定出7個(gè)蛋白(剩下五個(gè)因蛋白濃度較低無法成功鑒定出來)4)鑒定出的上述分泌蛋白經(jīng)查文獻(xiàn)得知大部分對神經(jīng)損傷的修復(fù)具有一定的促進(jìn)作用。結(jié)論:1.使用羥乙基淀粉和人淋巴細(xì)胞分離液可提取原代的間充質(zhì)干細(xì)胞。2.人臍血間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)后在分泌蛋白方面更接近真正的許旺細(xì)胞。3.本實(shí)驗(yàn)成功鑒定出間充質(zhì)干細(xì)胞在誘導(dǎo)分化為類許旺細(xì)胞的過程中增加的7個(gè)分泌蛋白點(diǎn),且這些分泌蛋白也是許旺細(xì)胞所分泌的。這些分泌蛋白進(jìn)一步證明了所誘導(dǎo)的類許旺細(xì)胞和正常的許旺細(xì)胞在分泌蛋白組學(xué)方面具有一定的相似性,但同時(shí)還存在一定的差距,誘導(dǎo)方案還需要進(jìn)一步完善。
【關(guān)鍵詞】：臍血間充質(zhì)干細(xì)胞 體外誘導(dǎo)分化 分泌蛋白組學(xué) 許旺細(xì)胞 質(zhì)譜鑒定
【學(xué)位授予單位】：蚌埠醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R329.28
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 引言9-10
• 第一部分 原代間充質(zhì)干細(xì)胞提取、鑒定、擴(kuò)增和誘導(dǎo)10-21
• 1.材料與方法10-15
• 2.結(jié)果15-19
• 3.討論19-21
• 第二部分 引產(chǎn)胎兒坐骨神經(jīng)來源的許旺細(xì)胞的體外培養(yǎng)與純化21-26
• 1.材料與方法21-24
• 2.結(jié)果24-25
• 3.討論25-26
• 第三部分 間充質(zhì)干細(xì)胞、類許旺細(xì)胞與許旺細(xì)胞三種細(xì)胞分泌蛋白組學(xué)的比較26-46
• 1.實(shí)驗(yàn)材料27
• 2.操作步驟27-36
• 3.結(jié)果36-42
• 4.討論42-46
• 結(jié)論46-47
• 參考文獻(xiàn)47-49
• 致謝49-50
• 附錄50-59
• 附錄A 英中文術(shù)語和縮略語對照表50-51
• 附錄B 個(gè)人簡歷51
• 附錄C 已發(fā)表論文51
• 附錄D 綜述51-59
• 參考文獻(xiàn)57-59

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 林巍;唐雪梅;孔圓;王卉;劉開彥;;CD271及CD133用于陽性分選富集骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的比較[J];中國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志;2008年02期

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中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 柳亦松;幾種重要的細(xì)胞分泌蛋白質(zhì)組研究[D];湖南師范大學(xué);2010年

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本文編號：301456